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整合素β1反义寡核苷酸对宫颈癌HeLa细胞体外增殖的影响

作　者: 蒋艳
导　师: 毛熙光
学　校: 泸州医学院
专　业: 妇产科学
关键词: 整合素β1 反义寡核苷酸宫颈癌HeLa细胞转染
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：利用整合素β1反义脱氧寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)封闭宫颈癌HeLa细胞的整合素β1基因，观察其对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及HeLa细胞整合素β1表达情况，探讨整合素β1在宫颈癌发生、发展中可能的作用。方法：1.利用脂质体介导核苷酸序列转染宫颈癌HeLa细胞。实验分整合素β1反义寡核苷酸序列+脂质体组(ASODN组)、随机寡核苷酸序列+脂质体组(RODN组)、脂质体组、空白对照组(HeLa细胞组)。2.采用WST-1法检测转染整合素β1反义寡核苷酸后不同时间段宫颈癌HeLa细胞增殖情况。3.利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞整合素β1mRNA的表达。4.Western blot技术检测各组细胞整合素β1蛋白的表达。5.流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡。6.所得各组数据均以均数±标准差(x±s)表示，由SPSS17.0统计软件进行方差分析(F检验)和t检验，以P<0.05为有统计学差异。结果：1.反义寡核苷酸（ASODN)转染24小时即可对宫颈癌HeLa细胞生长产生抑制，作用24小时、48小时、72小时ASODN组抑制率分为：26.17%，39.78%，45.6%，RODN组抑制率分别为：7.41%，2.73%，2.58%，脂质体组抑制率分别为：4.47%，2.36%，2.21%。由此可见反义寡核苷酸（ASODN)对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显抑制作用，且呈时间依赖性，随着作用时间延长抑制作用增强。2.转染整合素β1反义寡核苷酸48小时可使HeLa细胞的整合素β1mRNA表达水平明显降低，作用48小时、72小时ASODN组的整合素β1mRNA表达分别为：0.8659±0.0647，0.5950±0.0066，明显低于HeLa细胞组，差异有统计学意义(P<0.05)。脂质体组和RODN组分别在相同时间点与HeLa细胞组相比，整合素β1mRNA表达水平有降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。ASODN组在24小时、48小时、72小时三个时间点整合素β1mRNA表达分别为1.367±0.01221，0.9361±0.009，0.6981±0.0075，结果表明反义寡核苷酸能特异性封闭整合素β1基因。3.转染整合素β1反义寡核苷酸72小时后，宫颈癌HeLa细胞整合素β1蛋白由1.0900±0.0367降低为0.8370±0.0650，与RODN组、脂质体组、HeLa细胞组相比，差异有统计学意义(P<0.05)，RODN组、脂质体组与HeLa细胞组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。4.转染整合素β1反义寡核苷酸组HeLa细胞48小时后其生长周期被阻滞在G2/M期，ASODN组、RODN组、脂质体组、HeLa细胞组G2期细胞比率分别为：(32.20±1.8)%，(15.16±0.5)%，(13.80±1.0)%，(13.23±0.6)%，ASODN组与HeLa细胞组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；脂质体组和RODN组与HeLa空白组相比较，细胞周期无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。5.ASODN组细胞随着转染后时间的延长，其凋亡率逐渐增加，相同时间点分别与HeLa细胞组相比较，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：1.宫颈癌HeLa细胞株上有整合素β1的表达；2.抑制宫颈癌HeLa细胞株整合素β1基因和蛋白的表达，可有效抑制癌细胞增殖，促进细胞凋亡；3.整合素β1反义寡核苷酸可将宫颈癌HeLa细胞的周期阻滞在G2/M期。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-23
实验结果  23-32
讨论  32-39
结论  39-40
参考文献  40-45
缩略词表  45-46
致谢  46-47
宫颈透明细胞癌的诊治进展（综述）  47-57
  参考文献  53-57

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