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去甲斑蝥素对梗阻性肾病间质纤维化的作用及机制研究

作　者: 刘玉平
导　师: 李瑛
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 去甲斑蝥素梗阻性肾病肾间质纤维化蛋白磷酸酶2A
分类号: R692.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的本课题拟通过UUO动物模型和TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞,从两个方面进行研究：1.观察NCTD对UUO肾病大鼠肾小管间质纤维化及PP2Ac表达的影响；2.观察NCTD对TGF-β1刺激的HK-2细胞细胞外基质和PP2Ac表达的影响；方法1.建立UUO大鼠模型：SD大鼠随机分为正常对照组(n=5)、UUO模型组、NCTD低剂量(0.05mg/kg/d)组和高剂量(0.1mg/kg/d)组。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,Sham组只游离输尿管而不结扎,术后14天处死动物,取结扎侧肾脏,同时处死假手术组大鼠,取出肾组织。2.常规培养HK-2细胞,实验分组：空白对照组；TGF-β1刺激组；TGF-β1+NCTD干预组；每组设3个复孔。3.采用免疫组化方法、Western blot方法、RT-PCR方法检测肾组织FN、Col-Ⅰ、E-cadherin、α-SMA、PP2Ac表达以及分布情况。结果1.NCTD对UUO大鼠肾间质纤维化和肾小管上皮细胞转分化的影响：免疫组化、Western blot均显示,与UUO模型组大鼠比较,NCTD组以剂量依赖方式能明显抑制FN、Col-Ⅰ蛋白表达,同时下调α-SMA蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。2. NCTD对UUO大鼠PP2Ac的表达的影响：免疫组化、Western blot均显示,与UUO模型组大鼠比较,NCTD组以剂量依赖方式能明显抑制PP2Ac蛋白表达,RT-PCR也显示NCTD组以剂量依赖方式能明显抑制UUO模型组大鼠PP2Ac mRNA表达。3. NCTD对TGF-β1刺激肾小管上皮细胞细胞外基质表达和肾小管上皮细胞转分化的影响Western blot显示,与TGF-β1刺激肾小管上皮细胞组比较,NCTD可以下调TGF-β1刺激肾小管上皮细胞FN、Col-Ⅰ蛋白表达,同时下调α-SMA蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。RT-PCR显示,NCTD干预组可以下调TGF-β1刺激肾小管上皮细胞FN、Col-Β mRNA表达,同时下调α-SMA mRNA表达,上调E-cadherin mRNA表达,抑制肾小管上皮间质转分化。4. NCTD对TGF-β1刺激肾小管上皮细胞PP2Ac表达的影响Western blot显示,与TGF-β1刺激肾小管上皮细胞组比较,NCTD可以下调TGF-β1刺激肾小管上皮细胞PP2Ac蛋白的表达,RT-PCR显示,NCTD可以下调TGF-β1刺激肾小管上皮细胞PP2Ac mRNA的表达。结论(1) NCTD可减轻肾间质纤维化和肾小管上皮细胞转分化。(2) NCTD可抑制UUO大鼠和TGF-β1刺激肾小管上皮细胞PP2Ac表达。(3) NCTD抗肾小管间质纤维化作用可能与其抑制PP2Ac表达有关

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-10
目录  10-11
中英文对照表  11-12
前言  12-14
第一部分去甲斑蝥素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化及PP2Ac表达的研究  14-37
  1 实验材料与研究方法  14-25
  2 结果  25-37
第二部分 NCTD对TGF-β1刺激HK-2细胞细胞外基质及PP2Ac表达的影响  37-47
  1 材料和方法  37-41
  2 实验结果  41-47
讨论  47-54
结论  54-55
参考文献  55-60
综述  60-66
  参考文献  64-66
研究生期间发表文章和参与课题情况  66-67
致谢  67

去甲斑蝥素对梗阻性肾病间质纤维化的作用及机制研究

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