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低聚氨基寡糖对腺嘌呤诱导慢性肾衰竭大鼠的保护作用研究

作　者: 职绚
导　师: 韩宝芹
学　校: 中国海洋大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 低聚氨基寡糖 腺嘌呤 慢性肾衰竭 血清生化因子 抗氧化性 组织切片
分类号: R692.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的慢性肾衰竭(chronic rennal failure, CRF)是多种慢性肾病发展的最终结局,是肾实质损害至晚期的危重综合征。CRF早期肾脏肥大,肾小球和肾小管间质间的细胞外基质的累积,最终发生肾小球硬化,肾间质纤维化及肾小管萎缩。由于慢性肾脏疾病的病理病机复杂,目前对其发病机制尚不清楚,还没有任何有效的治疗方法以延缓和治疗慢性肾脏疾病,最终导致CRF是毫无疑问的。肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏病的共同病理机制,由于尿毒素和转分化的影响造成正常功能的肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells, RTECs)减少或消失。因此建立体外RTECs的原代培养方法,对体外研究导致肾脏疾病和失调的因素和机制及筛选治疗药物至关重要。甲壳寡糖和壳寡糖(COS),是一类低聚合度水溶性的氨基寡糖类,克服了高分子量甲壳素和壳聚糖的高度不溶性,具有独特的生物生理活性。研究表明壳寡糖在治疗急性肾衰竭方面取得了良好的研究成果。但是甲壳寡糖和COS对腺嘌呤诱导CRF的作用研究报道很少,因此本论文选择甲壳寡糖和COS,研究其对腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭大鼠的保护作用,为生物医学界研究CRF的病理机制提供理论依据。方法在动物水平上,以Wistar大鼠为研究对象,通过建立慢性肾衰竭大鼠模型研究了低聚氨基寡糖对慢性肾衰竭大鼠的保护作用。用灌胃腺嘌呤羧甲基纤维素钠悬浊液的方法,建立了大鼠慢性肾衰竭动物模型,设定尿毒清颗粒组作为阳性对照组及三个不同剂量的壳寡糖、甲壳寡糖实验组对大鼠进行每天灌胃。观察记录大鼠一般生活状态,在灌胃低聚氨基寡糖的不同时间段取大鼠血清及肾脏,称重计算肾脏重量系数,制备肾组织匀浆液,测定大鼠血清生化因子血清肌酐(Serum creatinine, SCr)、尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)和肾脏组织匀浆中总超过氧化物酶(Total Superoxide Dismutase, T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Oxidase, GSH-Px)活性,评价低聚氨基寡糖对慢性肾衰竭大鼠的肾功能及抗氧化性的影响。留取肾脏组织固定,制作组织切片,HE染色观察,分析低聚氨基寡糖对大鼠肾脏组织的保护作用。在细胞水平上,用网筛加酶消化法分离大鼠肾小管上皮细胞(RTECs),通过体外培养大鼠RTECs,应用MTT法研究壳寡糖对其生长的影响。结果动物实验中,慢性肾衰竭大鼠动物模型的SCr、BUN比正常对照组大鼠明显升高,有显著性差异,大鼠慢性肾衰竭动物模型建立成功。壳寡糖、甲壳寡糖灌胃后壳寡糖-L、甲壳寡糖-H组在降低血清SCr、BUN和提高肾组织中T-SOD、GSH-Px活性方面效果最好,相对与模型对照组,血清SCr、BUN水平分别降低100%/63.75%、63.75%/52.93%,肾组织中T-SOD、GSH-Px活力分别升高63.36%/62.41%、82.16%/55.90%,总体比尿毒清颗粒组效果好。组织学观察结果表明,模型组大鼠肾实质病变严重,肾小管变性扩张,肾小球变性系膜增厚,灌胃壳寡糖和甲壳寡糖明显缓解了大鼠肾脏组织中肾实质损伤。细胞实验中,成功分离出RTECs,原代培养至9-10长满至复层,消化接种MTT检测COS在125-500μg/mL范围内,有不同程度的促进RTECs生长的作用,效果最显著的是250μg/mL。其结果解释了动物实验中COS能够缓解肾实质损伤,改善肾功能的作用。结论壳寡糖和甲壳寡糖对腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭大鼠有一定的保护作用,能够改善肾组织,且壳寡糖能够改善肾功能与体外壳寡糖促进RTECs的生长有关,为生物医学界研究CRF发病机理提供一定的理论依据。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-10
缩略语  10-16
第一章 前言  16-34
  1 慢性肾衰竭的定义、发病机理和临床表现  16-20
    1.1 慢性肾衰竭的定义  16
    1.2 CRF病因及发病机制  16-18
      1.2.1 病因  16-17
      1.2.2 发病机制  17-18
    1.3 临床表现及诊断  18-20
      1.3.1 临床表现  19-20
      1.3.2 诊断  20
  2 慢性肾衰竭模型方法学研究进展  20-23
    2.1 肾切除法模型  21-22
      2.1.1 部分肾切除法  21
      2.1.2 肾切除加动脉分支结扎法  21
      2.1.3 肾切除加电凝法  21-22
      2.1.4 肾切除加冷冻法  22
      2.1.5 肾切除加透热法  22
    2.2 药物模型  22-23
      2.2.1 阿霉素模型  22
      2.2.2 嘌呤霉素模型  22-23
      2.2.3 正定霉素模型  23
      2.2.4 消痔灵模型  23
      2.2.5 柔红霉素模型  23
    2.3 生物学方法  23
  3 慢性肾衰主要治疗方法和治疗药物  23-29
    3.1 早期预防  24
    3.2 对症治疗  24-26
      3.2.1 纠正水电解质失衡和酸中毒  24-25
      3.2.2 治疗高血压  25
      3.2.3 治疗贫血  25
      3.2.4 治疗高脂血症  25-26
      3.2.5 延缓肾功能恶化的药物  26
    3.3 替代治疗  26-27
      3.3.1 血液透析  26
      3.3.2 腹膜透析  26-27
      3.3.3 肾移植  27
    3.4 并发症的防治  27-28
      3.4.1 心脏病变  27
      3.4.2 出血倾向  27-28
      3.4.3 高磷血症  28
    3.5 慢性肾衰竭的中医药治疗  28-29
  4 甲壳寡糖及壳寡糖概述  29-33
    4.1 甲壳寡糖及壳寡糖  29-30
    4.2 甲壳寡糖和壳寡糖在生物医药领域的应用  30-33
      4.2.1 抗肿瘤的作用  30-31
      4.2.2 增强人体免疫力的作用  31
      4.2.3 抗氧化及降血糖作用  31-32
      4.2.4 降低胆固醇,调血脂,防动脉粥样硬化  32
      4.2.5 抑菌作用  32
      4.2.6 其他作用  32-33
  5 本论文研究意义  33-34
第二章 甲壳寡糖及壳寡糖的性质研究  34-38
  1 实验材料及主要仪器  34
    1.1 主要实验材料  34
    1.2 主要实验仪器  34
  2 实验方法  34-37
    2.1 外观形态及溶解性观察  34
    2.2 水分测定  34-35
    2.3 灰分测定  35
    2.4 脱乙酰度测定  35
    2.5 样品聚合度及分子量的测定  35-37
  3 结果  37-38
第三章 低聚氨基寡糖对腺嘌呤诱导慢性肾衰竭大鼠的作用  38-53
  1 实验材料及主要仪器  38-39
    1.1 主要实验材料  38-39
    1.2 主要实验仪器  39
  2 实验方法  39-41
    2.1 腺嘌呤混悬液的配置  39-40
    2.2 大鼠慢性肾衰竭模型的建立  40
    2.3 分组及给药  40
    2.4 观察指标  40-41
    2.5 数据的统计学处理  41
  3 结果  41-50
    3.1 慢性肾衰竭大鼠模型制作结果  41-42
    3.2 一般生活状态观察  42-43
    3.3 COS、甲壳寡糖对慢性肾衰竭大鼠肾脏重量系数的影响  43-45
    3.4 COS、甲壳寡糖对慢性肾衰竭大鼠肾功能指标的影响  45-46
    3.5 COS、甲壳寡糖对慢性肾衰竭大鼠肾组织抗氧化能力的影响  46-48
    3.6 肾脏组织病理变化  48-50
  4 讨论  50-52
  5 小结  52-53
第四章 壳寡糖对体外培养的大鼠原代肾小管上皮细胞生长的作用  53-60
  1 实验材料及主要仪器  53-54
    1.1 主要实验材料  53
    1.2 主要实验仪器  53-54
  2 实验方法  54-55
    2.1 大鼠原代肾小管上皮细胞培养方法  54-55
      2.1.1 大鼠肾小管节段的分离(网筛滤过法)  54
      2.1.2 酶消化肾小管节段及培养  54-55
    2.2 COS对RTECs生长的影响(MTT法)  55
  3 结果  55-59
    3.1 原代RTECs的生长观察  55-56
    3.2 COS对RTECs形态的影响  56-58
    3.3 COS对RTECs生长的影响  58-59
  4 讨论  59
  5 小结  59-60
本文总结  60-61
参考文献  61-71
主要创新点  71
存在的不足与进一步研究计划  71-72
致谢  72
个人简历  72-73
在学期间发表的学术论文与研究成果  73

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病 > 肾功能衰竭
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