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类风湿关节炎患者血清蛋白质组学研究

作　者: 张炎
导　师: 张奉春
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: LC-ESI-MS/MS 免疫印迹法血清淀粉样蛋白A 病情活动度早期类风湿关节炎 TNF-α拮抗剂磁珠 MALDI-TOF-MS
分类号: R593.22
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

实验目的：运用磁珠结合MALDI-TOF-MS的方法,筛选早期RA患者与正常对照、非早期RA患者血清样本,寻找与早期RA相关的特异性生物标记；通过对肿瘤坏死因子-α (TNF-α)拮抗剂治疗前后以及MTX治疗患者血清的研究,探索预测治疗效果的生物标记物。材料与方法：收集RA患者和健康人的血清标本,-80。C冰箱保存。样本在一个冻融周期内同批进行磁珠结合MALDI-TOF-MS分析,绘制蛋白指纹图谱。应用Biomarker Wizard软件和Biomarker Patterns软件识别蛋白峰信息。结果：①在低分子量范围内可识别的40个差异蛋白峰中,16个蛋白峰在早期RA和正常对照之间存在显著差异表达(p<0.05),以此为基础,利用Biomarker Patterns软件寻找最佳的树形分类模型,结果得到由3个鉴别蛋白峰(8885.88Da、7974.48Da、2017.03Da)组成的树形模型,该模型对早期RA患者和正常对照进行分组的敏感性、特异性分别是94.872%、96.552%。早期和非早期RA患者之间发现6个表达存在显著差异的蛋白峰。②依那西普和英夫利西单抗治疗前后均发现数个差异表达蛋白峰,其中3个(6431.93Da、8067.02Da、15901.5Da)在两种治疗中变化趋势相同；以ACR20作为治疗有效标准,英夫利西单抗治疗组发现1个蛋白峰(7930.687Da)在治疗有效患者高表达；依那西普治疗组发现3个蛋白峰(2203.471Da、6472.352Da、15343.48Da)在不同疗效组间差异表达。③接受依那西普和英夫利西单抗治疗患者之间只发现3个差异蛋白峰,且表达水平接近：接受TNF-α拮抗剂和MTX治疗患者之间检测到13个显著差异蛋白,其中10825.84Da、11479.36Da、15326.58Da在TNF-α拮抗剂治疗组显著高表达,2042.45Da、2175.10Da在MTX治疗组显著高表达。结论：通过磁珠结合MALDI-TOF-MS的方法,寻找生物标记并建立的树形分类模型,能够以很高的敏感性和特异性鉴别早期RA患者和正常人,早期患者的特异性蛋白峰可能与RA早期发病机制有关;同时发现多种与TNF-α拮抗剂治疗相关的蛋白峰,其中4个蛋白峰对预测TNF-α拮抗剂的治疗反应有提示作用。实验目的：本研究通过蛋白电泳、免疫沉淀、串联质谱等蛋白组学研究方法,对RA血清中分子量11680Da的目的蛋白进行分离、纯化和鉴定；并探索其与RA活动度的关系。材料和方法：所用血清均来自论文第一部分病例组。通过SDS-PAGE方法对11.7kD目标蛋白进行分离、纯化；利用液相色谱-电喷雾-串联质谱(LC-ESI-MS/MS)方法,对纯化蛋白进行鉴定和测序;利用免疫印迹、免疫沉淀方法,验证目的蛋白存在。结果：RA患者血清通过单向SDS-PAGE可在12kD附近发现显著高表达条带,经过LC-ESI-MS/MS鉴定为血清淀粉样蛋白A；通过免疫沉淀和免疫印迹法,证实该蛋白确实在RA患者高表达；MALDI-TOF-MS测定的SAA蛋白峰强度与RA患者病情活动程度(DAS28评分、ESR)显著相关(p<0.01)。结论：血清淀粉样蛋白A(MW11.7kD)在RA患者中高表达,且与病情活动度正相关,可以作为监测病情活动的一个炎性指标。

全文目录

英文缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
第一部分  12-37
  实验目的  12
  材料与方法  12-20
  实验结果  20-32
  讨论  32-37
第二部分  37-56
  实验目的  37
  材料与方法  37-44
  实验结果  44-51
  讨论  51-56
结论  56-57
参考文献  57-61
综述  61-76
  参考文献  71-76
致谢  76

类风湿关节炎患者血清蛋白质组学研究

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