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干燥综合征患者外周血Th17、Treg及B细胞研究

作　者: 王琳
导　师: 赵岩
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 辅助T细胞17(Th17) 调节T细胞(Treg) 记忆B细胞 B细胞激活因子(BAFF) 流式细胞染色
分类号: R593
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景：干燥综合征是以口干、眼干为主要临床表现的自身免疫性疾病,病理上以腺体尤其是外分泌腺炎症细胞浸润及次级生发中心形成为主要特点。目前关于该病的发病机制尚不清楚,对该病无针对性有效治疗手段。Th17细胞和Treg细胞是近年来发现的辅助性T细胞的新亚群,对免疫性疾病的发生有关键调节作用。目前关于Th17、Treg在该病中的研究较少。另外B细胞在该病的发病过程中起关键作用,而B细胞的激活需要B细胞激活因子(BAFF)的作用,BAFF与该疾病的发生发展的具体关系目前尚不清楚。目的：评价干燥综合征患者Th17、Treg、记忆性B细胞的外周表达及其与临床相关性,评价BAFF的外周表达及其与临床的相关性。方法：干燥综合征国际合作联盟(SICCA)与北京协和医院合作确诊的原发性干燥综合征(pSS)患者41例,患者家属7例及正常健康献血者27例为样本,采集外周血用流式细胞仪分析Th17、Treg、记忆性B细胞,ELISA法检测血浆中的B细胞激活因子(BAFF)浓度,并且结合患者临床资料进行分析。结果：患者Th17细胞数目较正常人显著升高(5.02±1.95%vs3.8%±1.0%,p=0.004)：记忆性B细胞数目较正常人显著升高(11.1%±5.1%vs9.24%±6.99%,p=0.0002)：BAFF浓度较正常人有显著性升高(1.18±0.72ng/ml vs0.43±0.19ng/ml p=0.0005)：Treg数目较正常人无明显差异(3.14±1.63%vs2.8%±1.2%,p=0.098)。患者及家属检测结果显示Th17数目无显著性差异(5.26%±1.35%vs5.2%±2.1%,p=0.94)；Treg数目无显著性差异(3.17±1.62%vs3.08%±1.08%p=0.90)；记忆性B细胞数目无显著性差异(16.26%±8.3%vs8.75%±3.82%,p=0.088)；患者BAFF水平较其家属有显著性升高(1.29±0.46ng/ml vs0.56±0.11ng/ml p=0.015)。同时结合临床资料分析得出Thl7与IgG具有正相关关系(r=0.457,p=0.005),但对评估疾病严重程度的临床症状、体征及血清学IgM.IgA、补体C3、补体C4、口腔科、眼科检查并无相关关系(p>0.05)。Treg与唇腺病理Focus评分成正相关关系(r=0.480,p=0.005)。CD27+B细胞与5min未刺激唾液量成正相关(r=0.345,p=0.021),与眼科角结膜评分成负相关关系(r=-0.321p=0.041), BAFF与临床症状、体征及血清学IgM、IgA、IgG、补体C3、补体C4、口腔科、眼科检查并无相关关系(p>0.05)。结论：1Th17在患者及一级亲属中较正常人高表达,与IgG正相关,说明Th17可能与干燥综合征发病有关。2Treg表达较正常人无差异,说明Treg与疾病的关系目前尚不清楚。3记忆B细胞在患者及一级亲属高表达,与临床指标负相关,说明记忆B细胞在疾病发生发展过程中有重要作用。4患者BAFF水平明显高于正常人及一级亲属,与临床指标不相关,说明BAFF可能参与疾病的发生,但与疾病的严重程度不平行。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
前言  8-10
实验设计  10-11
实验材料  11-13
  一. 化学试剂和耗材(按公司分类)  11
  二. 仪器  11-12
  三. 软件  12
  四. 试剂配制  12-13
实验方法  13-17
  外周血细胞流式细胞仪检测  13-16
    外周血标本采集  13
    流式细胞染色  13-15
    流式细胞检测  15-16
  ELISA法测干燥综合征患者及健康人血浆BAFF  16-17
    准备试剂  16
    ELISA步骤  16
    检测及结果分析  16-17
结果  17-33
  一. 病人基本情况(所有临床资料均来自于SICCA数据库)  17-18
  二. 流式软件分析方法步骤  18-19
  三. 流式软件分析结果  19-24
  四. 数据统计分析  24-25
  五. 与临床资料结合分析  25-30
  六. 干燥综合征患者、健康人血浆中BAFF水平结果  30-31
  七. BAFF与临床资料的相关性分析  31-33
实验小结  33-34
实验讨论  34-38
参考文献  38-39
致谢  39-40
综述  40-46
  参考文献  42-46
附录：病人入选标准  46

干燥综合征患者外周血Th17、Treg及B细胞研究

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