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抗胎儿免疫在妊娠期高血压疾病发病机制中的作用

作　者: 刘丽平
导　师: 廖爱华
学　校: 华中科技大学
专　业: 妇产科学
关键词: 妊娠期高血压疾病抗HLA抗体体液免疫 IL-6 单核细胞 CD14 ELISPOT 记忆B细胞
分类号: R714.246
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

妊娠期高血压疾病(Hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP)严重威胁母胎健康,是世界范围内导致围产期母胎高发病率和死亡率的主要原因之一。正常妊娠的维持,需要体液免疫与细胞免疫的共同参与。诸多研究表明,在HDCP患者中,存在着不同程度的免疫失衡。有关细胞免疫因素参与HDCP发病机制的研究报道较多,而有关体液免疫因素对其影响的研究较缺乏,有限的研究多聚焦于血清中细胞因子的变化。本研究从胎儿和母体方面了解HDCP患者真实的体液免疫状态,并从抗胎儿免疫角度探讨其在HDCP发病机制中的作用。目的检测HDCP患者及正常足月剖宫产孕妇外周血中抗HLA抗体,比较母体血循环中抗HLA抗体特异性是否与胎儿HLA基因型一致,评价母体抗HLA抗体是否是被胎儿源性抗原致敏,探讨母体抗胎儿源性体液免疫在HDCP中的作用。方法选择46例正常足月剖宫产妇女为对照组,60例HDCP患者为病例组;病例组按病程进展分为妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组,每组各20例。用Flow PRA法对母体血清中抗HLA抗体进行初筛,对于抗HLA抗体阳性者,用Luminex法检测其抗体特异性;同时用SSP-PCR法检测相应孕妇及胎儿的HLA基因型,比较母体外周血中抗HLA抗体类型是否与其胎儿HLA基因型一致。结果对照组母体外周血抗HLA-Ⅱ类抗体阳性率为6.5%;妊娠期高血压组为20%,轻度子痫前期组为20%,重度子痫前期组为25%。病例组HLA-Ⅱ类抗体阳性率较对照组高,其差异具有统计学意义(P < 0.05)。病例组各组间母体外周血抗HLA-Ⅱ类抗体阳性率随疾病进展加重而升高,但组间差异无统计学意义(P > 0.05)。对照组母体外周血抗HLA-I类抗体阳性率为19.6%,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组均为20%,其差异无统计学意义(P > 0.05)。比较母胎HLA基因类型,母体外周血中抗HLA-Ⅱ类抗体类型与其胎儿HLA基因型一致。结论HDCP患者外周血中抗胎儿HLA-Ⅱ类抗体明显增加,且被胎儿源性HLA致敏。目的比较HDCP患者及正常足月剖宫产孕妇胎儿脐血中IL-6阳性单核细胞百分比,了解HDCP患者胎儿单核细胞的激活状态。方法选择46例正常足月剖宫产妇女作为对照组,60例HDCP患者为病例组;病例组按病程进展分为妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组,每组各20例。采集脐血(EDTA抗凝)经密度梯度离心分离单个核细胞,经双色荧光标记(FITC-CD14和PE-IL-6单克隆抗体)染色、流式细胞技术测定胎儿脐血中IL-6阳性单核细胞百分比。结果对照组胎儿脐血中IL-6阳性单核细胞百分比为0.78%±0.54%;妊娠期高血压组为4.38%±0.91%,轻度子痫前期为5.73%±2.18%,重度子痫前期为6.29%±2.70%。病例组胎儿脐血中IL-6阳性单核细胞百分比较对照组高,其差异有统计学意义(P < 0.01)。病例组各组间胎儿脐血中IL-6阳性单核细胞百分比随疾病进展加重而升高,各组间差异有统计学意义(P < 0.05)。结论HDCP患者脐血中胎儿单核细胞是被激活的,且随其严重程度增强。目的以正常足月剖宫产为对照,比较HDCP妇女外周血中抗胎儿HLA抗体分泌记忆B细胞的频数差异,探讨抗胎儿HLA抗体分泌记忆B细胞在HDCP发病机制中的作用。方法选择46例正常足月剖宫产妇女作为对照组,60例HDCP患者为病例组;病例组按病程进展分为妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组,每组各20例。取相应胎儿脐血(EDTA抗凝),采用密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,与IFN-γ共培养72h后制备成B细胞溶胞体,作为胎儿源性抗原来源,包被96微孔硝酸纤维素膜板;加入体外培养并经美洲商陆(Pokeweed mitogen, PWM)预刺激的孕妇外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),采用酶联免疫斑点法(Enzyme-linked Immunospot Assay,ELISPOT)检测HLA抗体分泌记忆B细胞。比较各组记忆B细胞频数(特异性ASC/总ASC百分比)的差异。结果正常妊娠足月剖宫产组,抗胎儿HLA抗体分泌记忆B细胞频数为0.37%±0.13%;妊娠期高血压组为0.67%±0.11%,轻度子痫前期组为0.79%±0.21%,重度子痫前期组为0.94%±0.27%。HDCP组抗胎儿HLA抗体分泌记忆B细胞频数高于正常妊娠组,其差异有统计学意义(P < 0.01)。HDCP各组间抗胎儿HLA抗体分泌记忆B细胞频数随疾病进展加重而增高,重度子痫前期与妊娠期高血压组比,其差异有统计学意义(P < 0.05);但轻度子痫前期组与妊娠期高血压组相比,其差异无统计学意义(P > 0.05)。结论HDCP组母体血循环中抗胎儿HLA抗体分泌记忆B细胞频数较正常妊娠组增加,其可能是母体抗胎儿异体免疫增强的原因。

全文目录

英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-11
Abstract  11-15
本研究的创新点  15-16
引言  16-20
  参考文献  18-20
第一部分妊娠期高血压疾病中母体抗胎儿异体免疫状态的研究  20-45
  实验一母体抗胎儿HLA 抗体在HDCP 中的作用研究  20-36
    材料与方法  20-26
    结果  26-31
    讨论  31-34
    参考文献  34-36
  实验二 HDCP 中胎儿单核细胞激活状态的研究  36-45
    材料与方法  36-40
    结果  40-41
    讨论  41-43
    参考文献  43-45
第二部分抗胎儿HLA 抗体分泌记忆B 细胞在HDCP 中的作用  45-55
  材料与方法  45-50
  结果  50-51
  讨论  51-53
  参考文献  53-55
综述  55-69
  参考文献  63-69
附录攻读学位期间发表文章  69-70
致谢  70

抗胎儿免疫在妊娠期高血压疾病发病机制中的作用

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