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TLR9及记忆B细胞在IgA肾病黏膜免疫机制中的作用

作　者: 伍刚
导　师: 彭佑铭
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: IgA肾病 TLR9 腭扁桃体切除记忆B细胞浆母细胞甲型链球菌 IgA1
分类号: R692.3
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

IgA肾病是最常见的原发性肾小球肾炎,以系膜区IgA1沉积为特征。对于其具体的黏膜免疫机制还不清楚。目前关于其机制有较多的临床研究认为,患者在急性扁桃体炎后其尿检等临床症状加重,而在腭扁桃体切除后其病情进展放缓,认为在IgA肾病是一个与腭扁桃体等相关黏膜组织有关的疾病。Van Den Wall Bake等人在20余年前提出了黏膜-骨髓轴的概念：他们认为IgA肾病的发病机制与IgA在黏膜组织及骨髓中的异常免疫应答相关；但是所有的这些研究都是基于动物试验模型得出的,在IgA肾病患者的临床研究中目前还没有得到证实。本文通过TLR9和记忆B细胞的检测,研究在IgA肾病中患者中是否存在黏膜免疫功能的异常,以及腭扁桃体切除后其变化及相互影响,进一步为IgA肾病中异常黏膜-骨髓轴的存在提供线索,从而为将腭扁桃体切除作为IgA肾病的治疗手段提供理论依据。第一章TLR9在IgA肾病患者腭扁桃体及外周血中的表达及腭扁桃体切除前后的变化观察目的观察TLR9介导的黏膜(固有)免疫应答在IgA肾病患者腭扁桃体、外周血中表达是否异常,并观察腭扁桃体切除后TLR9的变化,从而分析腭扁桃体切除前后对TLR9介导的黏膜(固有)免疫应答的影响。方法选取经临床和肾脏病理确诊为IgA肾病患者腭扁桃体及外周血做为观察组,将慢性扁桃体炎患者扁桃体及正常健康者外周血作为对照组。采用免疫组化观察TLR9阳性细胞在扁桃体组织上的分布；用流式细胞检测扁桃体及外周血B细胞中TLR9阳性表达,并检测切除扁桃体前后IgA肾病患者外周血B淋巴细胞中TLR9阳性表达的变化。结果免疫组化显示：扁桃体中TLR9阳性细胞表达无论在IgA肾病组与非肾炎慢性扁桃体炎组均主要在扁桃体上皮层分布,尤以上皮层下部明显,淋巴小结、生发中心及其周围结间组织少量散在分布,与对照组比较,IgA肾病患者TLR9阳性细胞在上述部位分布明显增加(p<0.05)。与对照组相比,IgA肾病患者的腭扁桃体及外周血B细胞中TLR9阳性细胞百分率表达升高(p<0.05),腭扁桃体切除后至IgA肾病患者至血尿蛋白尿明显好转后,其TLR9在外周血B细胞中表达下降(p<0.05),同时与正常人外周血相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论IgA肾病患者的腭扁桃体及外周血中存在有TLR9的高表达,提示其介导的固有免疫应答增强。体液免疫应答是参与IgA肾病发病机制的重要因素。扁桃体切除后可使这种增强的固有免疫应答下调,并恢复到正常水平。第二章记忆B细胞(属于CD19+CD27+细胞)在IgAN患者腭扁桃体及外周血表达,及腭扁桃体切除前后变化观察目的观察IgA肾病患者腭扁桃体、外周血中记忆B细胞表达是否异常；通过记忆B细胞的表达了解与临床表型的相关关系；在腭扁桃体切除后,了解记忆B细胞的变化,为进一步研究黏膜与骨髓的关系提供思路。方法选取的观察组及对照组同第一章。采用免疫荧光共聚焦方法分析CD19+CD27+细胞在扁桃体组织上的分布；通过流式细胞术检测记忆B细胞在两组扁桃体及外周血B细胞上表达；扁桃体切除前后外周血记忆B细胞的表达变化；IgA肾病患者外周血记忆B细胞表达与血尿、蛋白尿的关系及其在不同临床表型(血尿、蛋白尿)分组之间的比较。结果免疫荧光共聚焦观察发现IgA肾病患者扁桃体组织中CD19+CD27+细胞(包括记忆B细胞和浆细胞)在小结帽,生发中心及小节问区表达明显增多；通过流式细胞分析示：记忆B细胞在IgA肾病患者扁桃体及外周血高表达；并且在IgA肾病患者扁桃体及外周血记忆B细胞表达与其临床表型(血尿、蛋白尿)的高低正相关,并根据血尿蛋白尿的不同临床表型分组(具体分组见本文第二章)后,各组记忆B细胞表达比较有统计学差异；IgA肾病患者其扁桃体及外周血记忆B细胞表达呈正相关；腭扁桃体切除后扁桃体及外周血中记忆B细胞及CD19+CD27+细胞表达下降,而且与正常人相比无统计学差异；结论IgAN患者扁桃体及外周血中存在着记忆B细胞及CD19+CD27+双阳性细胞的高表达,提示其介导的体液免疫应答增强。在腭扁桃体切除后上述细胞在外周血中的表达下降,并能恢复到正常水平；IgAN中可能存在着一个扁桃体(黏膜)-外周血-骨髓的异常通路；扁桃体和外周血中记忆B细胞表达的高低是判断IgA肾病患者临床病情进展的重要指标；第三章甲型链球菌刺激对IgAN患者腭扁桃体、外周血TLR9、记忆B细胞影响及腭扁桃体切除前后外周血IgAl表达变化目的了解扁甲型链球菌刺激后扁桃体及外周血中TLR9、记忆B细胞表达的变化及TLR9、记忆B细胞增长率的相关性；扁桃体切除前后IgA1浓度变化,并进一步阐明IgAl的来源。方法选取的观察组及对照组同第一章。首先对分离后的淋巴细胞培养12天后进行凋亡率观察,然后对淋巴细胞进行甲型链球菌刺激7天后,采用流式细胞术检测其TLR9、记忆B细胞增长的变化,分析其相关性；采用ELISA检测IgA肾病患者扁桃体切除后外周血血清IgA1的变化。结果人扁桃体及外周血淋巴细胞在传统的培养条件下体外培养12天凋亡率无明显变化；与对照组相比,在IgA肾病患者中扁桃体及外周血TLR9与记忆B细胞受甲型链球菌刺激后在表达同时增高更明显,并且两者呈正相关：与切除前相比,IgA肾病患者扁桃体切除后外周血血清IgA1浓度下降且有统计学差异。结论IgAN患者受到HS刺激后,TLR9及记忆B细胞表达上调,提示其介导的固有免疫应答及体液免疫应答增强；TLR9可能就是诱导记忆B细胞表达的上游因子；IgAN患者外周血IgA1至少部分来源于扁桃体。

全文目录

摘要  4-10
ABSTRACT  10-20
前言  20-23
第一章 TLR9在IgA肾病患者腭扁桃体及外周血中的异常表达及腭扁桃体切除前后的变化观察  23-44
  1.1 材料与方法  24-33
  1.2 结果  33-41
  1.3 讨论  41-43
  1.4 小结  43-44
第二章记忆B细胞(属于CD19~+CD27~+细胞)在IgAN患者腭扁桃体及外周血中的异常表达,及腭扁桃体切除前后其变化观察  44-68
  2.1 材料与方法  45-50
  2.2 结果  50-63
  2.3 讨论  63-67
  2.4 小结  67-68
第三章甲型链球菌刺激对IgAN患者腭扁桃体、外周血TLR9、记忆B细胞影响及腭扁桃体切除前后外周血IgA1表达变化  68-86
  3.1 材料与方法  69-72
  3.2 结果  72-82
  3.3 讨论  82-85
  3.4 小结  85-86
全文总结  86-89
参考文献  89-98
综述  98-109
  参考文献  104-109
附录  109-111
致谢  111-112
攻读学位期间主要研究成果  112

TLR9及记忆B细胞在IgA肾病黏膜免疫机制中的作用

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