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系统性硬化症患者骨髓间充质干细胞的生物学特性

作　者: 黄晓燕
导　师: 曾小峰
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 系统性硬化症间充质干细胞发病机制免疫调节细胞因子
分类号: R593
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究目的建立SSc患者骨髓间充质干细胞(MSC)体外分离扩增的方法,并初步研究SSc患者骨髓MSC的一般生物学特性和免疫调节功能。研究方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法从SSc患者和对照骨髓中分离MSC,从形态、表面标志和多向分化潜能等方面进行鉴定,通过描绘生长曲线,流式细胞术PI染色检测细胞周期研究其生长特性。通过混合淋巴细胞反应和淋巴母细胞转化实验研究SSc患者MSC的免疫调节功能,用RT-PCR方法检测MSC免疫相关因子的表达。研究结果1.通过密度梯度离心和贴壁筛选法从骨髓中分离出纺缍状形态均一的MSC, SSc患者骨髓MSC扩增能力有限,传代6次以后逐渐衰老。2.流式细胞术检测MSC表面标志：CD34、CD45、CD31、CD83、CD80、HLA-DR(一), CD166、CD73、CD105、CD90、HLA-ABC(+), SSc患者MSC表型与对照无明显差异,与培养条件有关。经分选的细胞纯度达90%以上。3.流式检测细胞周期显示：SSc患者骨髓MSC90%以上处于G0/G1期,在传代过程中无明显改变,与对照无明显差异,符合干细胞的特性。4.SSc患者和对照MSC在特定诱导条件下均能分化为骨、脂肪等间质细胞。一些SSc患者表现出更强的成骨分化倾向。5.SSc患者和对照MSC在一定条件下均能轻度刺激异基因T细胞增殖,而抑制有丝分裂原引起的T细胞增殖，呈剂量依赖性，随MSC浓度增加而明显。6.SSc患者MSC在mRNA水平表达免疫调节相关因子,观察到部分患者MSC的巨噬系集落刺激因子(M-CSF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平有所降低。研究结论1.SSc患者骨髓中能分离扩增出纯度较高的MSC,体外可传代6次以上,传代过程中能保持干细胞的生物学特性。2.SSc患者骨髓MSC具有多向分化潜能,部分患者表现出成骨分化倾向。3.SSc患者MSC在一定条件下抑制T细胞增殖,呈剂量依赖性。4.SSc患者MSC在mRNA水平表达免疫调节相关因子。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
英文缩略词表  8-10
前言  10-12
技术路线  12-13
第一部分 SSc患者骨髓间充质干细胞的分离纯化与鉴定  13-36
  实验材料  13-18
  实验方法  18-25
  实验结果  25-32
  小结  32-33
  讨论  33-36
第二部分 SSc患者骨髓MSC对T细胞增殖的影响  36-47
  实验材料  36-38
  实验方法  38-41
  实验结果  41-44
  小结  44-45
  讨论  45-47
全文结论  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-51
综述  51-54
  参考文献  53-54

系统性硬化症患者骨髓间充质干细胞的生物学特性

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