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应用蛋白质组学方法检测系统性红斑狼疮的生物学标记物

作　者: 陈焕
导　师: 唐福林
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 神经精神狼疮 MALDI-TOF-MS 树形分类模型脑脊液蛋白质谱泛素蛋白(ubiquitin) 免疫沉淀免疫印迹法酶联免疫吸附测定系统性红斑狼疮激素冲击治疗蛋白质质谱
分类号: R593.241
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

第一部分：神经精神狼疮脑脊液蛋白质指纹图谱及分析目的筛选神经精神狼疮(NPSLE)脑脊液生物标志物,并建立相应NPSLE疾病的树形分类模型。材料和方法用MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠生成脑脊液蛋白质谱,比较NPSLE治疗前组(39例)与无神经精神症状的系统性红斑狼疮组(non-NPSLE,10例)之间和脊柱侧凸组(17例)的差异蛋白峰；建立NPSLE的树形分类模型,并用其他中枢神经系统受累疾病(伴神经精神症状的自身免疫性疾病5例,腰椎间盘突出13例)进行盲法检验。比较26例NPSLE患者治疗前后脑脊液蛋白质谱的差异蛋白峰。结果NPSLE治疗前组与非精神神经狼疮组(脊柱侧凸和non-NPSLE)脑脊液蛋白质谱共有25个差异峰,用其中质荷比为3237,4312,4514,4550,6688,6378,6822,8349,8595,11744和16230差异峰建立NPSLE树形分类模型,其对源数据的敏感性92.1%,特异性100%,盲法检验显示该模型分类NPSLE的特异性为85.7%。26例NPSLE患者治疗前后脑脊液质谱有18个差异峰,其中质荷比为4450、6822和8595蛋白峰显著降低,而在一例难治性NPSLE中,这三个差异峰并无变化。结论MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠可用于脑脊液蛋白质组研究,发现了多个潜在脑脊液生物标志物可能用于NPSLE检测、诊断和病情评估,建立了敏感性及特异性均好的NPSLE树形分类模型。第二部分：神经精神狼疮脑脊液蛋白质指纹图谱差异蛋白峰鉴定研究背景及目的泛素蛋白(ubiquitin)是一种大多数真核细胞中76氨基酸蛋白,主要功能是标记需要分解掉的蛋白质,使其被水解。多项研究鉴定脑脊液SELDI-TOF-MS质谱的质荷比为8.6kda蛋白峰对应泛素蛋白(ubiquitin)。试验拟鉴定脑脊液质谱质荷比8.6kda的差异蛋白峰为ubiquitin蛋白。材料和方法使用兔抗人ubiquitin抗体进行脑脊液免疫沉淀后,分别运用MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠法和免疫印迹法检测免疫沉淀反应后上清及沉淀蛋白。结果ubiquitin抗体免疫沉淀后上清蛋白质谱中质荷比8.6kda的蛋白峰强度显著下降；NPSLE患者CSF原液在免疫印迹中出现分子量介于6kd和14kd的目的条带,在加入ubiquitin抗体免疫沉淀后上清没有发现介于6kd和14kd的目的条带；抗ubiquitin的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测NPSLE脑脊液中ubiquitin浓度较无神经精神症状的SLE组明显升高。结论脑脊液蛋白质谱的质荷比8.6kda蛋白峰对应ubiquitin蛋白,神经精神ubiquitin蛋白,神经精神狼疮(NPSLE)患者脑脊液泛素蛋白(ubiquitin)水平升高,提示泛素蛋白(ubiquitin)可能成为NPSLE的生物标志物。第三部分活动性红斑狼疮甲基强的松龙冲击前后的蛋白质指纹图谱及分析目的筛选活动性系统性红斑狼疮(SLE)甲基强的松龙冲击治疗前后血清生物标志物,并建立相应SLE甲基强的松龙冲击前后的树形分类模型。材料和方法用MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠生成血清蛋白质谱,比较(38例)冲击治疗前后相关的血清的差异蛋白峰。结果冲击治疗前有效组和无效组蛋白质谱共有8个差异峰,用其中质荷比为4492、9198、5713、8469、10751、3456、9059差异峰建立SLE冲击治疗前的树形分类模型,其对数据源的敏感性为92.6%、特异性为100.0%；冲击治疗十四天后有效组和无效组蛋白质谱共有25个差异峰,用其中5261、5350、5939、6001、6122、7217、7997、8891、10901等差异峰建立SLE冲击治疗十四天后关于治疗有效组和无效组的树形分类模型,其对数据源的敏感性为96.3%、特异性为100.0%；SLE治疗前组(38例)和后组(38例)蛋白质谱共有18个差异峰,用其中质荷比为6958、27186、22844、6743、11404和3054差异峰建立SLE甲强冲击前后树形分类模型,其对源数据的敏感性84.2%,特异性89.5%；结论MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠可用于血清蛋白质组研究,发现了多个潜在血清生物标志物可能用于SLE诊断、激素冲击治疗反应判断和进行SLE活动性评估,建立了敏感性及特异性均好的SLE树形分类模型。

全文目录

英文缩略词表  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-12
  参考文献  11-12
第一部分神经精神狼疮患者脑脊液蛋白质指纹图谱及分析  12-36
  实验目的  12
  材料与方法  12-22
    一、病例来源和入选标准  12-15
    二、实验方法  15-20
    三、实验基本原理  20-21
    四、数据处理  21-22
  结果  22-28
  讨论  28-34
  参考文献  34-36
第二部分神经精神狼疮脑脊液蛋白质指纹图谱特异蛋白峰鉴定  36-56
  实验目的  36
  材料与方法  36-44
    一、标本来源及准备  36-37
    二、实验方法  37-43
    三、实验基本原理  43-44
    四、数据处理  44
  结果  44-47
    一、脑脊液免疫沉淀联合蛋白质谱分析结果  44-45
    二、脑脊液免疫沉淀联合WB实验结果  45-46
    三、脑脊液ELISA实验结果  46-47
  讨论  47-54
  参考文献  54-56
第三部分活动性红斑狼疮甲基强的松龙冲击前后的蛋白质指纹图谱及分析  56-74
  实验目的  56
  材料与方法  56-70
    一、病例来源和入选标准  56-59
    二、实验方法  59-61
    三、实验结果  61-70
  讨论  70-73
  参考文献  73-74
结论  74-75
综述  75-87
  参考文献  81-87
致谢  87

应用蛋白质组学方法检测系统性红斑狼疮的生物学标记物

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