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内吗啡肽-1对人树突状细胞免疫功能的影响及机制研究

作　者: 潘治宇
导　师: 李正红
学　校: 蚌埠医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 内吗啡肽-1 树突状细胞类风湿性关节炎 toll样受体 μ-阿片受体
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

研究背景：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是最为常见的以关节炎症表现为主的自身免疫性疾病。RA的临床表现较为广泛，持续性和进展性的外周关节滑膜炎症、血管翳形成以及由此导致的骨和软骨的损伤是RA发病的主要特点。RA的发病机制仍然没有阐明，目前认为RA是一种多因素联合介导的自身免疫性疾病。RA可以被看作是未知抗原诱导T细胞异常活化介导的自身免疫病。树突状细胞(dendritic cells，DC)是功能最为强大的专职抗原提呈细胞，能够激活初始免疫反应。DC在免疫监视的淋巴组织中捕获、处理抗原，而后在移行至外周淋巴组织的过程中逐渐分化成熟。成熟的DC可将抗原肽提呈给T细胞，同时DC可表达协同刺激分子诱导调节性T细胞和B细胞免疫反应，分泌细胞因子产生相应的生物学效应。因此，DC在RA的发病中起着重要的作用。内吗啡肽（endomorphin，EM）是新发现的μ-阿片受体的内源性配体，具有广泛的生物学作用，如镇痛、心血管效应和免疫应答等。文献报道EM-1可抑制骨关节炎、类风湿关节炎病人滑液IL-6、IL-8的分泌，提示EM-1有抗炎作用。那么EM-1是否能通过影响DC的分化成熟和免疫功能，而参与RA的形成和发展，目前尚未见报道，值得我们进行探讨。目的：1.观察EM-1对人外周血单核细胞来源的树突状细胞成熟和功能的影响；2.从TLR2和TLR4探讨EM-1对树突状细胞免疫功能影响的机制；3.揭示EM-1对DC免疫调节的机理，为EM-1治疗RA提供理论和实验证据。方法：从正常人外周血中提取、分离出单个核细胞，用rhGM-CSF、rhIL-4诱导成为未成熟树突状细胞（imDC），用LPS刺激诱导imDC的成熟，在培养第六天的imDC分为4组：空白对照组、EM-1组、LPS组、LPS+EM-1组（LPS的用量均为100ng/ml，EM-1的用量均为10-6mmol/L），继续培养48h后收集细胞。1.倒置相差显微镜观察细胞形态的变化；流式细胞术检测DC的CD11c表达，分析DC的纯度，确定外周血DC体外培养体系的建立；2.流式细胞术检测各组DC表面Mu阿片受体、CD83、CD80、CD86、HLA-DR和CCR-7表达变化；ELISA法检测各组DC分泌细胞因子IL-10、IL-12的变化；3. T淋巴细胞增殖实验：CFSE法检测各组T淋巴细胞的增殖情况；ELISA法检测DC和T淋巴细胞共培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的变化；4.流式细胞术检测内吗啡肽-1诱导后树突状细胞表面TLR2、TLR4的表达， RT-PCR检测TLR2mRNA、TLR4mRNA的表达。结果：1.与空白组相比，EM-1组DC表面分子CD80、CD86和CCR-7表达有所增加， HLA-DR则显著增加；与LPS组相比，EM-1+LPS组DC表面分子HLA-DR表达有所增加，Mu阿片受体表达上调；CD83、CD80、CD86和趋化因子受体CCR-7则显著增加；ELISA检测结果显示EM-1作用于DC后，细胞因子IL-10和IL-12的分泌均减少；2. T淋巴细胞增殖实验结果显示EM-1抑制DC对同种异体T淋巴细胞的增殖反应能力，同时EM-1干预后T淋巴细胞增殖实验上清液中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌下降；3.流式细胞术和RT-PCR结果显示EM-1干预后DC表面TLR2、TLR4表达均下调。结论：1. EM-1使LPS刺激下DC表型HLA-DR、CD83、CD80、CCR7和CD86表达上调，EM-1抑制DC释放炎性因子IL-12和IL-10，EM-1可能参与DC介导的炎症反应；2. EM-1抑制DC对T淋巴细胞的增殖反应能力，减少DC和T淋巴细胞共培养上清液中IL-12和IFN-γ的分泌。提示EM-1抗炎作用与EM-1影响DC的免疫功能有关；3. EM-1对DC免疫功能的影响可能与DC表面TLR2、TLR4有关。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-13
本论文实验内容及流程图  13-14
第一部分：内吗啡肽-1 对人树突状细胞成熟和免疫功能的影响  14-30
  材料与方法  14-19
  结果  19-28
  讨论  28-29
  小结  29-30
第二部分：EM-1 对人树突状细胞 TLR2 和 TLR4 表达的影响  30-39
  材料与方法  30-34
  结果  34-37
  讨论  37-38
  小结  38-39
结论  39-40
参考文献  40-45
致谢  45-46
附录 A 英中文术语缩略语对照表  46-47
附录 B 常用试剂配制  47-48
附录 C 个人简历  48
附录 D 发表论文  48-49
附录 E 综述  49-56
  参考文献  54-56

内吗啡肽-1对人树突状细胞免疫功能的影响及机制研究

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