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目的:观察两种益生菌(乳酸杆菌,双歧杆菌)对溃疡性结肠炎的大鼠结肠粘膜Toll样受体4及TNF-a的变化及影响方法:将64只雄性SD大鼠,随机分四组,正常对照组、结肠炎模型组、乳酸杆菌组、双歧杆菌组;先将益生菌组预处理给与益生菌灌胃两周及四周后,采用三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导结肠炎模型组和益生菌组形成溃疡性结肠大鼠模型。造模处理后24小时处死大鼠。观察结肠粘膜的大体和组织学变化。以免疫组化方法检测TLR4,TNF-a的表达,以蛋白免疫印迹法(western blot)检测蛋白表达结果:(1)一般情况观察:正常组大鼠活动如常,毛发有光泽,饮食量正常;模型组大鼠精神萎靡,毛发无光泽,常卷缩而卧,饮食量减少,出现稀便、血便。益生菌干预组大鼠一般状况随干预时间延长出现的症状减轻,有少许活动,毛发欠光泽,未出现血便。(2)肉眼观察正常对照组肠道组织颜色呈白色,粘膜表面明亮光滑,无充血、水肿。模型组大鼠结肠之间粘连,结肠壁可见粘膜充血水肿,有多个大小不一的溃疡形成。益生菌干预组大鼠结肠壁粘膜充血水肿明显,及少许的溃疡形成。(3) HE染色镜下观察正常对照组大鼠直结肠组织见腺体排列整齐,隐窝正常,杯状细胞无减少,未见粘膜糜烂,出血;模型组大鼠结肠部位可见腺体大量破坏,排列紊乱,隐窝变性,隐窝脓肿形成,杯状细胞消失,大量的炎性细胞浸润。益生菌干预组可见腺体减少,部分出现隐窝脓肿,杯状细胞减少,炎性细胞浸润。(4)免疫组化及染色结果TLR4在各组肠道粘膜内均有表达。正常组大鼠肠道粘膜层内可见少许棕色颗粒沉着;与正常组比较,模型组大鼠腺体消失,可见多处棕色颗粒沉着;比正常组,益生菌组粘膜里棕色颗粒沉着较多,但比模型组少。(5)Western bolt与正常对照组相比,模型组结肠组织TLR4的表达显著增加(P <0.01). TNF-a表达显著升高(P <0.01);与与模型组相比,益生菌组结肠组织TLR4的表达显著减少(P <0.01),TNF-a表达显著减少(P <0.01)。其两种菌相比差异不大(P >0.05)结论:从免疫机制的视角观察到益生菌可能通过抑制Toll样受体4表达从而减少炎性因子TNF-a产生。
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