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绿原酸对体外培养成骨细胞活性影响的初步研究

作　者: 易继凌
导　师: 王朝元
学　校: 中南民族大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 绿原酸 成骨细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶 成骨分化相关基因
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


接骨草属于忍冬科接骨木属，接骨草的根、茎、叶、花及果实均可入药。在传统中医药中，它可治疗风湿疼痛、跌打损伤和骨折。目前关于接骨草防治骨质疏松和促进成骨的报道较多，但其促进成骨及骨折愈合的有效成分尚不清楚。本研究以接骨草的主要化学成分之一——绿原酸(chlorogenic acid,CGA)为研究对象，研究其对体外培养的成骨细胞活性的影响，以期阐明其是否具有成骨活性，为接骨草的临床应用提供理论依据。本研究以成骨细胞系MC3T3-E1为模型，用MTT法检测CGA对成骨细胞增殖的影响、用碱性磷酸酶试剂盒检测CGA对成骨细胞ALP活性的影响，并用实时荧光定量PCR技术检测CGA对成骨细胞成骨相关基因表达的影响。MTT实验结果表明，11.02~88.19μmol/L的CGA对成骨细胞的增殖均具有明显的促进作用，因此，本研究以22.05和44.09μmol/L两个浓度的CGA进行进一步研究。CGA对成骨细胞ALP活性的影响的结果表明，CGA长期处理(6天)具有抑制成骨细胞ALP活性的作用。实时荧光定量PCR结果显示，在整个培养过程中，CGA可以促进Col-1、OCN、BMP-2基因的表达。CGA短期处理细胞(2天)可以促进Jun-D、c-Jun、c-fos，Fra-1，Fra-2，ALP，Runx2，Osterix等基因的表达；CGA长期处理细胞(6天)可以促进BSP，OPN基因的表达。综上所述，CGA具有调控成骨细胞增殖和分化的能力，对成骨细胞前体的分化具有一定的抑制作用，即CGA处理不利于干细胞向成骨细胞的分化。但是，它通过促进骨基质的形成和骨成熟分化而促进新骨成熟。因此，CGA具有一定的成骨活性，是接骨草的成骨有效成分之一。

全文目录


英文缩写检索  5-6
摘要  6-7
Abstract  7-12
第1章 前言  12-18
  1.1 接骨草的研究进展  12-15
    1.1.1 接骨草所含化学成分研究进展  12-13
    1.1.2 接骨草所含化学成分的生物学活性  13-15
  1.2 绿原酸的生物学活性研究进展  15-16
    1.2.1 抗氧化作用  15
    1.2.2 抗肿瘤作用  15-16
    1.2.3 抗肝损伤的作用  16
    1.2.4 抗病毒作用  16
    1.2.5 诱导骨髓干细胞的分化  16
  1.3 研究目及和意义  16-18
第2章 成骨细胞的培养  18-29
  2.1 引言  18-19
  2.2 材料和方法  19-24
    2.2.1 主要试剂  19
    2.2.2 实验仪器  19-20
    2.2.3 试剂配制  20-21
    2.2.4 实验方法  21-24
  2.3 实验结果  24-27
    2.3.1 细胞形态观察  24-26
    2.3.2 MC3T3-E1 增殖率及其碱性磷酸酶活性  26-27
  2.4 实验讨论  27-29
第3章 绿原酸对成骨细胞增殖的影响  29-33
  3.1 引言  29-30
  3.2 材料和方法  30-32
    3.2.1 主要试剂  30
    3.2.2 器材与仪器  30
    3.2.3 溶液的配制  30-31
    3.2.4 实验方法  31
    3.2.5 统计学分析  31-32
  3.3 实验结果  32
  3.4 讨论  32-33
第4章 绿原酸对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响  33-37
  4.1 引言  33
  4.2 材料和实验方法  33-36
    4.2.1 主要试剂  33-34
    4.2.2 器材与仪器  34
    4.2.3 溶液的配制  34
    4.2.4 实验方法  34-36
  4.3 结果  36
  4.4 讨论  36-37
第5章 绿原酸对成骨细胞成骨相关基因表达的影响  37-57
  5.1 引言  37-39
  5.2 材料和实验方法  39-45
    5.2.1 主要试剂  39
    5.2.2 器材与仪器  39-40
    5.2.3 溶液的配制  40
    5.2.4 实验方法  40-45
  5.3 实验结果  45-54
    5.3.1 总 RNA 电泳结果  45-46
    5.3.2 cDNA 电泳检测结果  46-47
    5.3.3 绿原酸对成骨细胞成骨相关基因表达的影响  47-54
  5.4 讨论  54-57
    5.4.1. 绿原酸对 AP-1 家族相关基因表达的影响  54-55
    5.4.2 绿原酸对前成骨细胞分化为成骨细胞相关基因的表达的影响  55
    5.4.3 绿原酸对成骨早期相关基因表达的影响  55-56
    5.4.4 绿原酸对骨成熟晚期表达基因的影响  56-57
结论  57-58
参考文献  58-64
致谢  64-65
攻读学位期间发表的论文  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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