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川赤芍中单萜苷类成分的分离及其抗肿瘤活性研究

作　者: 吴杨峥
导　师: 徐先祥
学　校: 华侨大学
专　业: 生物学
关键词: 川赤芍 单萜苷 分离纯化 抗肿瘤
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）是赤芍的主要来源之一，为中医临床常用的中药。药典中赤芍药材品种还包括芍药（Paeonia lactiflora Pall），此品种也作为中药白芍使用，导致临床上白芍和赤芍的使用较为混乱。芍药苷等单萜苷类化合物为赤芍类药材的主要活性成分，现代药理研究表明：芍药苷具有神经保护、降血糖、免疫调节、抗关节炎、肝损伤保护和抗肝纤维化等多种作用；赤芍总苷具有抗凝血作用、抗血栓形成、对缺血性损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗抑郁作用以及改善小鼠学习记忆能力等。本研究选择专门作为赤芍药用品种的川赤芍药材作为研究对象，用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等试剂对川赤芍的乙醇粗提物进行萃取，采用多种色谱分离方法（D101大孔吸附树脂、硅胶柱填料、ODS柱填料以及半制备高效液相分离）对川赤芍正丁醇部位的单萜苷类化合物进行分离纯化，共得到15个单体化合物，通过对其理化常数和光谱数据（ESI-MS、NMR、UV、IR）的分析，鉴定了其中6个化合物，分别为：芍药苷（PN-02/PN-03）、4-氧-甲基氧化芍药苷（PN-05）、4-氧-甲基芍药苷（PN-06）、4-氧-乙基芍药苷（PN-08）、paeonidanin（PN-12）、9-乙基芍药新苷A（PN-15），其中PN-05、PN-06和PN-12为本植物首次分离得到。对以上化合物进行体外抗肿瘤活性研究，用芍药苷干预人口腔表皮样癌KB细胞和人肺癌A549细胞的增殖，MTT法检测细胞增殖抑制率，结果发现，芍药苷对KB细胞和A549细胞均有抑制作用。平行检测芍药苷及各单体分别对KB细胞和A549细胞的抑制作用，发现芍药苷、4-氧-甲基芍药苷及混合物PN-07（两个难以分离的非芍药苷的化合物）均在1~100μmol/L范围内能有效抑制KB细胞增殖（P<0.05）；同时发现4-氧-甲基芍药苷、9-乙基芍药新苷A和PN-07在高剂量（30-100μmol/L）时能有效抑制A549细胞的增殖（P<0.05），而芍药苷则只有达到100μmol/L浓度才能显著抑制A549细胞增殖（P<0.05）。本文首次对川赤芍中单萜苷类化合物进行了系统分离纯化，初步药理结果显示，芍药苷、4-氧-甲基芍药苷、9-乙基芍药新苷A以及混合物PN-07具有明显的抗肿瘤活性，可为今后进一步研究中药赤芍的特征性成分及其活性提供参考。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-11
第1章 引言  11-28
  1.1 本文的立题依据及意义  11-12
  1.2 研究思路与论文结构  12
  1.3 赤芍的研究概况  12-28
    1.3.1 川赤芍的概况  12-14
    1.3.2 赤芍的化学成分  14-23
    1.3.3 赤芍的抗肿瘤作用研究进展  23-28
第2章 川赤芍中单萜苷类化合物的分离  28-39
  2.1 实验药品、试剂与仪器  28-29
    2.1.1 实验药品  28
    2.1.2 实验试剂  28
    2.1.3 实验主要仪器  28-29
  2.2 实验方法  29-33
    2.2.1 提取  29
    2.2.2 乙酸乙酯部位 D101 大孔吸附树脂粗分  29-31
    2.2.3 正丁醇部位 D101 大孔吸附树脂粗分  31
    2.2.4 正丁醇部位 PN20 硅胶柱层析分离  31-32
    2.2.5 正丁醇部位 PN30 硅胶柱层析分离  32
    2.2.6 ODS 开放柱纯化  32-33
    2.2.7 冷冻干燥  33
  2.3 实验结果与分析  33-37
    2.3.1 川赤芍总提物  33
    2.3.2 乙酸乙酯部位苷类化合物富集  33-35
    2.3.3 正丁醇部位苷类化合物富集  35-36
    2.3.4 正丁醇部位 PN20 的分离纯化  36-37
    2.3.5 正丁醇部位 PN30 的分离纯化  37
  2.4 小结  37-39
第3章 半制备高效液相色谱法分离纯化  39-47
  3.1 实验材料、试剂与仪器  39
    3.1.1 实验材料  39
    3.1.2 实验试剂  39
    3.1.3 实验仪器  39
  3.2 实验方法  39-44
    3.2.1 半制备高效液相色谱法分离样品  39-41
    3.2.2 半制备高效液相色谱法纯化样品 PN-05，08，12 和  41-43
    3.2.3 高效液相色谱法分析各化合物  43-44
  3.3 实验结果与分析  44-46
    3.3.1 5-5-4 的分离与 PN-05，08，12 和 15 的纯化  44
    3.3.2 标准品 PF 和各化合物 HPLC 分析结果  44-46
  3.4 小结  46-47
第4章 化合物理化分析与波谱解析  47-60
  4.1 实验材料、试剂与仪器  47
    4.1.1 实验材料  47
    4.1.2 实验试剂  47
    4.1.3 实验仪器  47
  4.2 实验方法  47-49
    4.2.1 熔点的测定  47-48
    4.2.2 液相色谱-质谱联用技术检测  48
    4.2.3 TLC 薄层层析色谱  48
    4.2.4 紫外光谱分析  48
    4.2.5 红外光谱分析  48-49
    4.2.6 核磁共振波谱  49
  4.3 实验结果与分析  49-56
    4.3.1 PN-02 与 PN-03  49-50
    4.3.2 PN-05  50-51
    4.3.3 PN-06  51-52
    4.3.4 PN-08  52-54
    4.3.5 PN-12  54-55
    4.3.6 PN-15  55-56
  4.4 小结  56-60
第5章 化合物对 KB 细胞和 A549 细胞增殖的影响  60-67
  5.1 实验材料、试剂与仪器  60-61
    5.1.1 实验材料  60
    5.1.2 实验试剂  60
    5.1.3 实验主要仪器  60-61
  5.2 实验方法  61-63
    5.2.1 细胞培养  61
    5.2.2 肿瘤细胞筛选  61-62
    5.2.3 各单体对 KB 细胞增殖的影响  62
    5.2.4 各单体对 A549 细胞增殖的影响  62-63
    5.2.5 统计学处理  63
  5.3 实验结果与分析  63-65
    5.3.1 各单体对 KB 细胞增殖的影响  63
    5.3.2 各单体对 A549 细胞增殖的影响  63-65
  5.4 小结  65-67
总结与展望  67-68
创新点  68-69
参考文献  69-75
致谢  75-77
附录 A 红外图谱  77-79
附录 B 核磁共振图谱  79-87
个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果  87

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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