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蓝靛果提取物对大鼠佐剂关节炎的抑制作用及其分子机制研究

作　者: 伍树松
导　师: 侯德兴
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生理学
关键词: 关节炎蓝靛果花青素抗炎抗氧化 NF-κB MAPK C3G
分类号: S858.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本论文通过动物试验和体外细胞培养实验,系统地探讨了蓝靛果提取物(BHE)对大鼠佐剂关节炎(AIA)的抑制作用及其相关分子机制。动物试验通过完全弗氏佐剂(CFA)诱导的大鼠AIA模型探讨了BHE对佐剂诱导的大鼠足爪肿胀和继发炎症的临床抑制作用。50只6周龄左右的雄性SD大鼠被随机分为5个处理：对照组(CTL)、诱导组(CFA)、BHE低剂量组(CFA+BHE75)、BHE中剂量组(CFA+BHE150)和BHE高剂量组(CFA+BHE300),并通过灌胃的方式分别给予大鼠不同剂量的BHE(0、0、75、150、300mg·kg-1·-1)。第一次给药后,除对照组(注射100μl生理盐水)外,在其余各组大鼠的右后足拓皮内注入100μlCFA诱导AIA,探讨BHE对AIA的防治作用。试验结果表明,BHE对大鼠AIA的抑制作用呈剂量依赖性,中剂量和高剂量的BHE显著抑制了CFA诱导的大鼠原发性(右后足)和继发性(左后足)足爪肿胀(P<0.05)。经CFA诱导后,大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)白介素-1β(IL-Iβ)、白介素-6(IL-6)和一氧化氮(NO)的水平显著上升(P<0.05),而BHE呈梯度抑制了以上炎性介质的产生,在BHE高剂量组中,TNF-α、IL-1β、IL-6和NO的水平均显著下降(P<0.05)。饲喂BHE同时使AIA大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及总抗氧化能力(T-AOC)呈梯度上升,而氧化产物丙二醛(MDA)的水平呈梯度下降,BHE高剂量组具有统计学显著意义(P<0.05)。此外,三个梯度的BHE均显著抑制了CFA引起的血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性的上升(P<0.05),改善了AIA大鼠的肝功能。体外细胞实验采用脂多糖(LPS)诱导的鼠科动物巨噬细胞RAW264.7炎症模型。RAW264.7细胞经不同浓度的BHE(75、150、300μg/ml)处理30分钟后,加入40ng/ml的LPS处理30分钟诱导炎症,探讨BHE的抗炎分子机制。实验结果表明,经LPS诱导后,细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和NO的水平显著上升(P<0.05),而BHE呈梯度抑制了细胞炎性介质的产生,这与动物试验结果一致。通过进一步的炎症信号介导通路分析表明,BHE通过抑制转化生长因子p活化激酶1(TAKI)介导的核转录因子-κB (NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的表达,在激活蛋白-1(AP-1)和干扰素调节因子3(IRF3)的参与下,抑制了环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达以及炎性细胞因子的生成与释放,从而减轻LPS诱导产生的细胞炎症。此外,通过高效液相色谱分析法(HPLC)与细胞实验相结合,本实验进一步探讨了BHE中主要的生物活性物质。结果表明,矢车菊素3-葡萄糖苷(C3G)是BHE中的主要生物活性成分。本研究结果表明,BHE对佐剂诱导的大鼠关节炎具有抑制作用；BHE降低了AIA大鼠血清中的炎性因子水平,提高了机体抗氧化能力,并改善了AIA大鼠的肝功能。细胞炎症信号途径分析结果表明,BHE通过阻断TAK1介导的NF-κB和MAPK通路,进而影响下游炎性基因的表达和炎性细胞因子的产生,抑制炎症的发生。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
缩略词表  8-10
目录  10-13
第一章绪论  13-25
  1 研究目的与意义  13-14
  2 国内外研究现状  14-23
    2.1 蓝靛果及花青素概述  14-15
    2.2 花青素的生理功能  15-18
    2.3 花青素在动物体内的吸收与代谢  18-19
    2.4 蓝靛果花青素的提取与分析  19-20
    2.5 关节炎概述及其调控机制  20-22
    2.6 大鼠佐剂关节炎模型的建立  22-23
  3 研究内容与方法  23-25
    3.1 研究内容  23-24
    3.2 技术路线  24-25
第二章试验研究  25-60
  试验一 BHE对大鼠佐剂关节炎的抑制作用的研究  25-38
    摘要  25
    1 前言  25-26
    2 材料与方法  26-28
      2.1 BHE的萃取  26-27
      2.2 大鼠AIA的诱导  27
      2.3 炎性介质的测定  27-28
      2.4 抗氧化酶及氧化产物的检测  28
      2.5 肝功能检测  28
      2.6 数据分析  28
    3 结果与分析  28-35
      3.1 BHE对CFA诱导的大鼠足爪肿胀的影响  28-30
      3.2 BHE对AIA大鼠炎性介质水平的影响  30-32
      3.3 BHE对AIA大鼠抗氧化能力的影响  32
      3.4 BHE对AIA大鼠肝功能的影响  32-35
    4 讨论  35-37
    5 小结  37-38
  试验二 BHE的体外抗炎功能及其分子机制的研究  38-60
    摘要  38
    1 前言  38-39
    2 材料与方法  39-42
      2.1 材料与试剂  39
      2.2 BHE的HPLC分析  39
      2.3 细胞培养与细胞毒性试验  39-40
      2.4 细胞上清液中炎性细胞因子的测定  40
      2.5 细胞上清液中NO含量的测定  40
      2.6 核蛋白提取  40-41
      2.7 蛋白质免疫印迹  41
      2.8 数据分析  41-42
    3 结果与分析  42-55
      3.1 BHE对RAW264.7细胞的毒性影响  42-43
      3.2 BHE对LPS诱导的巨噬细胞中炎性介质水平的影响  43-45
      3.3 BHE对LPS诱导的巨噬细胞中iNOS和COX-2表达的影响  45-47
      3.4 BHE对LPS诱导的细胞转录因子表达的影响  47
      3.5 BHE对MAPK信号通路的调控作用  47-50
      3.6 BHE对NF-κB信号通路的调控作用  50-53
      3.7 BHE的主要生物活性成分  53-55
    4 讨论  55-58
    5 小结  58-60
第三章结论与建议  60-61
  1 本研究的主要结论  60
  2 本研究的创新点  60
  3 有待进一步研究的问题  60-61
参考文献  61-71
致谢  71-72
个人简历  72

蓝靛果提取物对大鼠佐剂关节炎的抑制作用及其分子机制研究

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