学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

重组IBDV Vp2蛋白的制备与免疫保护试验

作　者: 谢怀东
导　师: 范红结
学　校: 南京农业大学
专　业: 兽医
关键词: IBDV 重组Vp2蛋白 基因工程疫苗 免疫保护试验
分类号: S852.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 28次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是引起我国及世界养禽业经济损失严重的主要传染病之一。目前,使用的常规弱毒疫苗和灭活疫苗的安全性和制造工艺存在缺陷,而为预防变异毒株采用的中强毒力活疫苗存在着较大的生物安全问题。因此,在当前IBD防控工作中,亟需免疫效力强、生物安全性高,并且针对当前流行毒株的新型IBD基因工程疫苗的问世。本试验内容包括两个部分：试验1：重组IBDVVp2蛋白的制备将本实验室前期构建的高效表达IBDVVp2的重组杆状病毒vBacA-Vp2(P3代)接种Sf9昆虫细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,出现特异性荧光；用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应；用Western-blotting分析,在53ku处有一条特异蛋白条带；电镜观察,重组Vp2蛋白能组装成病毒样颗粒。优化重组Vp2蛋白的表达条件,在感染前一天预铺Sf9细胞,待细胞密度达90%时,接种不同接毒量的vBacA-Vp2,分别于72、96和120h收集细胞培养物,用IBDV双抗体夹心ELISA测定细胞培养物效价。结果表明接种vBacA-Vp2的接毒量为0.01,表达时间为72h,收集的细胞培养物中重组Vp2蛋白含量最高,抗原效价达3.2×103。用优化的重组Vp2蛋白表达条件,接种vBacA-Vp2,收集细胞培养物,大量制备重组Vp2蛋白,为研制新型高效IBD病毒样颗粒基因工程疫苗制备抗原。试验2：重组IBDVVp2蛋白的免疫保护试验将重组杆状病毒vBacA-Vp2感染的昆虫细胞裂解物分别与ISA206、ISA50和白油三种佐剂乳化制成抗原,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA方法检测抗体效价,结果ISA206和IBDV B87株免疫组之间无显著差异(P>0.05),但均显著高于其他组(ISA50、白油和空白对照组)(P<0.01),细胞中和试验测定,ISA206组中和抗体效价显著高于其它4组(B87、ISA50.白油和空白对照组)(P<0.01)：二次免疫14d后,ELISA方法检测抗体效价,结果ISA206组显著高于其他组(B87、ISA50、白油和空白对照组)(P<0.01),而白油、ISA50和B87株免疫组之间没有显著性差异(P>0.05),细胞中和试验测定,ISA206组中和抗体效价显著高于其它4组(B87、ISA50、白油和空白对照组)(P<0.01)：用IBDVAH1强毒株对各免疫保护组进行攻毒试验,ISA206、白油和B87株免疫组攻毒存活率为1000%,ISA50组攻毒存活率为80%,空白对照组全部死亡。实验观察7d内,ISA206、白油组免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗方面显示出了应用前景。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
縮略语表  10-11
第一篇 文献综述  11-29
  第一章 传染性法氏囊病的研究进展  11-29
    1. IBDV的形态结构和分型  12-13
    2. IBDV的基因组结构  13-15
    3. IBDV基因组编码蛋白  15-19
    4. IBD的流行病学  19-21
    5. IBD的诊断及防控  21-25
    6. 新型高效疫苗的开发  25-29
第二篇 研究内容  29-49
  第二章 重组IBDV Vp2蛋白的制备  29-37
    摘要  29-30
    1. 材料与方法  30-32
      1.1 主要试剂  30
      1.2 菌株、细胞和病毒  30
      1.3 Sf9细胞培养与病毒感染  30
      1.4 重组Vp2蛋白的鉴定  30-31
      1.5 重组Vp2蛋白表达条件的优化  31
      1.6 重组Vp2蛋白的大量制备  31-32
    2. 结果  32-34
      2.1 Sf9细胞培养与病毒感染  32
      2.2 重组Vp2蛋白的鉴定  32-34
      2.3 重组Vp2蛋白表达条件的优化  34
    3. 讨论  34-35
    ABSTRACT  35-37
  第三章 重组IBDV Vp2蛋白免疫保护试验  37-49
    摘要  37-38
    1. 材料与方法  38-40
      1.1 细胞、病毒和主要试剂  38
      1.2 试验动物  38
      1.3 重组Vp2蛋白的免疫试验  38-39
      1.4 攻毒试验  39-40
    2. 结果  40-46
      2.1 重组Vp2蛋白的免疫试验  40-44
      2.2 重组Vp2蛋白攻毒试验  44-46
    3. 讨论  46-48
    ABSTRACT  48-49
参考文献  49-57
全文总结  57-59
附录：常用试剂的配制  59-63
致谢  63

相似论文

  1. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  2. IBDV配体表位P22/P221多肽合成功能鉴定及对CEF细胞文库的筛选,S852.65
  3. 传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2基因在家蚕中的表达及亚单位疫苗的初步研究,S855.3
  4. 应用DF-1细胞和激流式生物反应器大规模增殖IBDV的研究,S858.31
  5. 鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白配体结合表位多肽的原核表达及功能的研究,S858.31
  6. 减蛋综合症基因工程疫苗的研制,S858.31
  7. 板蓝根、黄芪和淫羊藿复合多糖注射剂的制备及体外抗病毒作用研究,S853.7
  8. SIgMλ轻链的基因沉默对IBDV结合DT40细胞的影响,S858.31
  9. 南方养殖草鱼呼肠孤病毒分子特性的分析及VP4重组蛋白免疫效果初步研究,S943
  10. 中华鳖群体死亡症病原菌的分离鉴定及其预防的研究,S947.1
  11. 猪水肿病与仔猪副伤寒二价基因工程疫苗研究,S858.28
  12. IBDV VP2/4/3与ChIL-18融合和共表达真核表达质粒的构建及其免疫原性研究,S852.5
  13. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征、表达与应用,S852.65
  14. 鸡传染性法氏囊病病毒快速、实用检测技术的研究,S858.31
  15. 重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究,S858.28
  16. 抗传染性法氏囊病毒单抗的制备和VP2基因的序列分析,S852.65
  17. IBDV-VP2多表位串联基因的原核表达及表达产物免疫原性分析,S852.65
  18. 空肠弯曲菌cheY,ciaB,dna,J,cfrA基因的克隆及其真核表达载体的构建,R378
  19. 重组鸡痘病毒rFPV-F-VPO实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用,S855.3
  20. IBDV VP2高变区基因片段的克隆、表达及其鉴定,S858.31
  21. 鸡传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白的克隆与表达,S852.65

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com