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枣外源小麦磷转运蛋白基因（TaPT2）遗传转化研究

作　者: 魏薇
导　师: 刘孟军
学　校: 河北农业大学
专　业: 果树学
关键词: 枣叶片再生根癌农杆菌介导遗传转化 TaPT2基因
分类号: S665.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

枣（Ziziphus jujuba Mill.）原产我国，是我国当今第一大干果树种。磷素是植物必需的大量营养元素。土壤易出现缺磷现象，磷转运蛋白是介导植物对磷素吸收和转运的主体，在调控植株磷素吸收和利用效率中具有重要作用。通过农杆菌介导方法转化枣，以期获得可以高效吸收利用磷素的优良耐缺磷转基因植株。本试验建立了枣叶片不定芽高效再生体系，并实现了根癌农杆菌介导的TaPT2小麦磷转运蛋白基因基因转化，获得了枣转基因植株。主要试验结果如下：1.建立了枣叶片不定芽高效再生体系。冬枣、月光枣、木枣3个品种叶块在愈伤诱导培养基MS+麦芽糖20g/L+琼脂5g/L+TDZ1.0mg/L+IBA0.1mg/L+AgNO31.0mg/L上出愈率均可达到100%，差异不显著。在芽分化培养基MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+6-BA0.8mg/L+IBA0.2mg/L上，冬枣和月光枣不定芽出芽率显著高于木枣，2个品种出芽率均超过了93%，而木枣仅为66.63%。芽分化培养基附加不同GA3、6-BA、TDZ时，不定芽发生情况差异明显。附加6-BA的培养基MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+IBA0.2mg/L+6-BA0.8～1.2mg/L，可防止不定芽玻璃化，每叶块出芽率和平均出芽数分别可达93.3%和3.53个。此外，乙酰丁香酮100mg/L可显著促进冬枣叶块不定芽发生，平均出芽数可高达7.30个，当乙酰丁香酮达到200mg/L时，会导致再生不定芽的畸形。2.确定了枣叶片再生临界选择压。附加除草剂Basta0.4mg/L时，叶块不产生不定芽但不会停止分化，可作为叶片再生临界选择压。0.6mg/L作为茎段生长选择压，该系统能有效进行筛选。3.建立了木枣叶片遗传转化体系。适宜的遗传转化条件为：叶片切割后针刺处理，预培养1天后，在OD600为0.6~0.8的菌液中侵染5min，在24℃条件下，在培养基MS+琼脂5g/L+麦芽糖20g/L+TDZ1.0mg/L+IBA0.1mg/L暗中共培养1~3d。抗性愈伤组织诱导率为8.75%。4.首次将小麦TaPT2基因转入到木枣中，获得了22个阳性植株，初步证实外源基因成功整合到枣树基因组中，并结合低磷胁迫下植株表型特征与磷含量验证了其中2个植株的外源基因已获得表达。

枣外源小麦磷转运蛋白基因（TaPT2）遗传转化研究

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