学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

沙丁胺醇免疫快速检测试纸技术研究

作　者: 张静
导　师: 李梦琴
学　校: 河南农业大学
专　业: 食品科学
关键词: 沙丁胺醇单克隆抗体快速检测
分类号: TS251.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 68次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

沙丁胺醇能选择性激动支气管平滑肌的β-受体，是选择性β-受体激动剂的一种，广泛用于治疗支气管哮喘。沙丁胺醇等β-兴奋剂还可以用作畜禽等的促生长剂，但是因为β-兴奋剂易在动物脏器中积聚残留，还会通过食物链进入到人的机体内部，严重影响甚至危害到人类健康，现在已经禁止在畜禽生产中将β-兴奋剂作为促进动物生长的饲料添加剂。“瘦肉精”克伦特罗的滥用引起有关方面的重视，国内外均己研究出快速有效的检测方法对其进行监测，沙丁胺醇作为克伦特罗的代替品具有同样促生长效果，而检测手段研究相对滞后，成为不法分子谋取经济利益的新手段，因此，建立快速、简单、方便、有效的检测手段是控制沙丁胺醇非法使用的迫切需要。本研究在分析沙丁胺醇免疫学特性的基础上，运用单克隆抗体技术制备其单抗，组装了胶体金试纸和FITC荧光免疫层析试纸，主要研究结果如下：1.沙丁胺醇人工抗原的制备与鉴定采用混合酸酐法将沙丁胺醇（SAL）偶联于载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA），合成免疫原SAL-BSA和包被原SAL-OVA，并利用紫外扫描（UV）和SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定，紫外扫描图谱显示合成的人工抗原的最大吸收峰发生偏移，证明偶联成功，SDS-PAGE结果表明BSA的泳动速度大于SAL-BSA，说明SAL-BSA的分子量大于BSA，进一步说明SAL与BSA偶联成功。2. SAL单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定用SAL-BSA免疫Balb/C小鼠4只，血清效价检测后选出细胞融合小鼠1只，将免疫小鼠脾细胞与NS0瘤细胞进行细胞融合，运用杂交瘤技术建立了分泌SAL单克隆抗体(mAb)的细胞株。经检测、筛选、克隆化后，获得4D3E7一株特异敏感的杂交瘤细胞株，用体内诱生腹水法制备SAL mAb，经鉴定4D3E7对SAL的IC50为1.35μg/L，与克伦特罗的交叉反应率为9.25%，与其他同类物无交叉反应。本实验制备的SAL mAb可用于SAL残留检测的免疫学试验。3.沙丁胺醇免疫快速检测试纸的研发应用胶体金免疫层析试验（GICA）原理，分别组装了快速检测免疫金标试纸（SAL-Strip）和FITC免疫荧光试纸。可用于检测尿液中沙丁胺醇的残留，试纸条可以在8到10min内完成。两种产品均具有快速、敏感、特异、简便等特点，可以广泛的用于对沙丁胺醇残留的定性、半定量和定量检测。

全文目录

致谢  4-8
摘要  8-9
1 引言  9-16
  1.1 沙丁胺醇概述  9-11
    1.1.1 沙丁胺醇的化学结构及性质  9-10
    1.1.2 沙丁胺醇的药物效力学  10-11
    1.1.3 沙丁胺醇的药物动力学  11
    1.1.4 沙丁胺醇残留对机体的危害  11
  1.2 沙丁胺醇残留的检测  11-15
    1.2.1 色谱分析技术  12-13
    1.2.2 免疫分析技术  13-15
  1.3 研究意义及内容  15-16
    1.3.1 课题提出依据和研究意义  15
    1.3.2 课题研究内容  15-16
2 沙丁胺醇完全抗原的制备及动物免疫  16-24
  2.1 材料  16-17
    2.1.1 试剂与溶液  16
    2.1.2 主要溶液的配制  16-17
    2.1.3 主要仪器  17
    2.1.4 试验动物  17
  2.2 方法  17-19
    2.2.1 沙丁胺醇琥珀酸酐衍生物的制备  17-18
    2.2.2 沙丁胺醇琥珀酸酐衍生物与载体蛋白的连接  18
    2.2.3 紫外全波长扫描（UV）鉴定沙丁胺醇完全抗原  18
    2.2.4 SDS-PAGE 鉴定沙丁胺醇完全抗原  18-19
    2.2.5 免疫学方法鉴定沙丁胺醇完全抗原  19
  2.3 结果与分析  19-22
    2.3.1 沙丁胺醇完全抗原的 UV 鉴定结果  19-20
    2.3.2 沙丁胺醇完全抗原的 SDS-PAGE 鉴定结果  20
    2.3.3 沙丁胺醇完全抗原的免疫学鉴定结果  20-22
  2.4 讨论  22-24
    2.4.1 关于沙丁胺醇完全抗原  22-23
    2.4.2 沙丁胺醇完全抗原的鉴定方法  23-24
3 沙丁胺醇单克隆抗体的制备与鉴定  24-33
  3.1 材料  24-25
    3.1.1 试剂  24
    3.1.2 主要仪器  24
    3.1.3 主要溶液  24-25
    3.1.4 试验动物和细胞  25
  3.2 方法  25-28
    3.2.1 杂交瘤细胞株的建立  25-27
    3.2.2 单克隆抗体的大量制备  27-28
    3.2.3 单克隆抗体免疫学特性鉴定  28
  3.3 结果与分析  28-31
    3.3.1 杂交瘤细胞株的建立  28-29
    3.3.2 沙丁胺醇单克隆抗体效价测定结果  29
    3.3.3 沙丁胺醇单克隆抗体敏感性鉴定结果  29-30
    3.3.4 交叉反应试验结果  30
    3.3.5 沙丁胺醇单克隆抗体亚型鉴定  30-31
    3.3.6 亲和力测定结果  31
  3.4 讨论  31-33
    3.4.1 杂交瘤细胞的融合与筛选  31-32
    3.4.2 关于超免  32
    3.4.3 关于单克隆抗体的免疫学特性鉴定  32-33
4 沙丁胺醇快速检测试纸的研究  33-45
  4.1 材料  33-34
    4.1.1 试剂与溶液  33
    4.1.2 主要仪器  33-34
    4.1.3 供试杂交瘤  34
  4.2 胶体金快速检测试纸研发  34-36
    4.2.1 沙丁胺醇单克隆抗体的制备与纯化  34
    4.2.2 胶体金的制备与质量鉴定  34
    4.2.3 胶体金免疫试纸的制备  34-36
  4.3 FITC 荧光检测试纸的制备  36-39
    4.3.1 沙丁胺醇单克隆抗体的纯化  36-37
    4.3.2 FITC 标记沙丁胺醇单克隆抗体  37
    4.3.3 FITC 荧光免疫层析试纸条的组装  37-38
    4.3.4 荧光免疫层析试纸条的性能鉴定  38-39
  4.4 结果与分析  39-44
    4.4.1 SAL mAb 与胶体金最佳标记浓度的确定  39
    4.4.2 FITC 标记沙丁胺醇单克隆抗体结果  39
    4.4.3 两种试纸的组装  39-40
    4.4.4 胶体金免疫层析试纸的性能测定  40-42
    4.4.5 FITC 荧光免疫层析试纸的组装  42-44
  4.5 讨论  44-45
    4.5.1 胶体金试纸的制备  44
    4.5.2 FITC 标记的荧光抗体的制备  44
    4.5.3 两种试纸的应用  44-45
5 结论  45-46
参考文献  46-50
ABSTRACT  50-51

沙丁胺醇免疫快速检测试纸技术研究

内容摘要

全文目录

相似论文