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双酶分步酶解制备鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽及生物活性的研究

作　者: 马华威
导　师: 郑斌
学　校: 浙江海洋学院
专　业: 海洋生物
关键词: 鮟鱇胶原蛋白肽表征抗氧化抗菌 MIC（最低抑菌浓度）
分类号: TQ914.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

本文基于鮟鱇鱼皮为原料，以胃蛋白酶、2709碱性蛋白酶分两步水解，制备胶原蛋白肽且探讨抗氧化及协同抗菌活性，为今后鮟鱇鱼皮及胶原蛋白或者其肽的制备和应用提供参照数据。胃蛋白初步酶解鮟鱇鱼皮制备出产量为9.23±0.54%的I型酶溶性胶原(PSC)；PSC中甘氨酸(Gly)和亚氨基酸含量分别为344残基/1000残基和193残基/1000残基，相对溶解度在NaCl浓度低于2%(w/v)时较高；PSC的超微结构似海绵，呈疏松式、纤维性、多孔状结构，其热变性温度(Td)为18.78°C。正交试验确定最佳制备该胶原蛋白肽工艺是：2709碱性蛋白酶添加量1%，料液比为1:20，酶处理时间6h，酶处理温度5°C；SDS-PAGE结果表明胶原蛋白肽主要含有相对分子量低于50kDa的多肽链；鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的发泡能力(FC)在pH4最大，酸性条件下pH对该胶原蛋白肽的发泡稳定能力(FS)影响较强；该胶原蛋白肽乳化能力(EAI)和乳化稳定性(ESI)呈pH趋于碱性而增强的趋势。结果表明，鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽质量分数为10mg/mL时其体外抗氧化作用效果最佳；经超滤后，分子量低于2000D的组分活性最高；给药后，小鼠体内过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著增强，丙二醛(MDA)含量增加，羟脯氨酸(Hyp)水平降低，且100mgkg-1d-1剂量效果最佳；该胶原蛋白肽和抗生素以比例配制成复合液能够提高抗生素抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的能力，对白色念球菌几乎无影响。

全文目录

摘要  8-9
ABSTRACT  9-11
目录  11-14
第一章绪论  14-22
  1.1 海洋生物活性多肽的研究  14-15
    1.1.1 海洋生物活性多肽的生理功能活性  14-15
    1.1.2 海洋生物活性多肽展望  15
  1.2 水产胶原蛋白的研究  15-16
  1.3 水产胶原蛋白肽的制备工艺研究现状分析  16-17
  1.4 鮟鱇鱼的开发和利用状况  17-21
    1.4.1 鮟鱇鱼的加工利用现状  19-20
    1.4.2 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽研究现状分析  20-21
  1.5 本课题的研究背景意义及内容  21-22
第二章鮟鱇鱼皮胶原蛋白的制备  22-32
  2.1 试剂与仪器  22-23
    2.1.1 材料  22
    2.1.2 试剂  22
    2.1.3 仪器设备  22-23
  2.2 实验方法  23-25
    2.2.1 鮟鱇鱼皮酶溶胶原蛋白(PSC)  23
    2.2.2 鮟鱇鱼皮和PSC相似性分析  23
    2.2.3 氨基酸组成分析  23
    2.2.4 扫描电镜分析  23-24
    2.2.5 鮟鱇鱼皮胶原蛋白溶解性分析  24
    2.2.6 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)  24
    2.2.7 紫外波谱分析  24
    2.2.8 傅里叶变换红外波谱分析  24
    2.2.9 鮟鱇鱼皮胶原蛋白溶液粘度测定  24-25
  2.3 结果与讨论  25-31
    2.3.1 鮟鱇鱼皮胶原的产量及相似性分析  25
    2.3.2 氨基酸组成分析  25-26
    2.3.3 PSC微结构  26-27
    2.3.4 PSC溶解性  27-28
    2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析  28-29
    2.3.6 波谱分析  29-30
    2.3.7 粘度和热变性分析  30-31
  2.4 本章小结  31-32
第三章鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽制备及理化性质  32-42
  3.1 试剂与仪器  32-33
    3.1.1 材料  32
    3.1.2 试剂  32
    3.1.3 仪器设备  32-33
  3.2 实验方法  33-34
    3.2.1 Hyp含量测定  33
    3.2.2 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽最佳酶解条件确定  33-34
    3.2.3 SDS-PAGE  34
    3.2.4 发泡性能  34
    3.2.5 乳化性能  34
  3.3 结果与分析  34-41
    3.3.1 L-Hyp标准曲线  34-35
    3.3.2 确定最佳酶处理条件  35-37
    3.3.3 最佳提取条件的确定  37-38
    3.3.4 SDS-PAGE分析  38-39
    3.3.5 发泡性能分析  39-40
    3.3.6 乳化性能分析  40-41
  3.4 本章结论  41-42
第四章鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽抗氧化活性的研究  42-48
  4.1 试剂与仪器  42-43
    4.1.1 材料  42
    4.1.2 试剂  42
    4.1.3 仪器设备  42-43
  4.2 实验方法  43-44
    4.2.1 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽清除OH活性测定  43
    4.2.2 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽清除O-2活性测定  43
    4.2.3 不同分子级鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的制备  43
    4.2.4 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽抗D-半乳糖诱导氧化活性的测定[117]  43-44
  4.3 结果与分析  44-47
    4.3.1 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除OH和O-2分析  44-45
    4.3.2 不同分子量的鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的制备  45
    4.3.3 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化活性  45-47
  4.4 结论  47-48
第五章鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽协同抗菌活性研究  48-55
  5.1 试剂与仪器  48
    5.1.1 材料  48
    5.1.2 试剂  48
    5.1.3 仪器设备  48
  5.2 实验方法  48-50
    5.2.1 菌种培养  48
    5.2.2 复配液配置  48-49
    5.2.3 抑菌圈测定  49
    5.2.4 受试菌对复配液的敏感试验判断  49
    5.2.5 抑菌曲线的测定  49
    5.2.6 最小抑菌浓度(MIC)的测定  49-50
  5.3 结果与分析  50-54
    5.3.1 鮟鱇胶原蛋白肽协同抗生素抑菌效果  50-51
    5.3.2 菌种受试菌对复配液敏感试验  51-52
    5.3.3 复配液抑菌曲线测定  52-53
    5.3.4 MIC测定结果  53-54
  5.4 本章小结  54-55
结果与讨论  55-56
参考文献  56-64
中英名称术语对照表  64-65
致谢  65-66
在读期间发表的学术论文及研究成果  66

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