学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

防己等中药活性成分与DNA相互作用的研究

作　者: 徐婧
导　师: 孔亮
学　校: 大连海洋大学
专　业: 环境科学
关键词: 微超滤 HPLC 中药活性成分 DNA
分类号: TQ460.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 8次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

中药有效成分的识别及药理研究是从中药产业中分化出来的新兴领域，本文以微超滤-HPLC的分析手段，针对中药防己、茵陈、丹参滴丸中有效成分的高效液相色谱分析方法，利用反相色谱对中药有效成分进行了定性分析，根据保留时间和相应的紫外可见光谱图确定了防己、茵陈、丹参滴丸的各活性成分色谱峰。并对其进行了定量分析，工作曲线线性关系良好，由高效液相色谱进行测定得到的结果精密度很高，重现性较好。采用HPLC方法，结合紫外可见光谱，对上述三种中药中的多种活性成分的检测波长和流动相进行了考察，建立了防己、茵陈、丹参滴丸的各活性成分的定性定量方法，分别对防己乙醇提取物中的粉防己碱、防己诺林碱两种主要有效成分、茵陈乙醇提取物中的绿原酸、咖啡酸、对羟基苯乙酮三种成分、市售丹参滴丸的乙醇提取物中的丹参素钠、原儿茶醛两种成分进行了定性定量分析。采用微超滤-HPLC分析方法考察了不同ct-DNA、mtDNA、大鼠肝脏DNA对防己、茵陈、丹参滴丸中活性成分的结合活性，建立ct-DNA、mtDNA、大鼠肝脏DNA的体外相互作用指纹分析方法。防己中防己诺林碱、粉防己碱与DNA结合活性较高，丹参滴丸中丹参素钠、原儿茶醛与ct-DNA结合活性较低。以紫外-可见光谱法测定相互作用的方式，以生物碱类物质粉防己碱、防己诺林碱分别与ct-DNA、mtDNA相互作用，并判断出粉防己碱与ct-DNA、mtDNA相互作用为嵌入作用；防己诺林碱与ct-DNA、mtDNA相互作用为沟槽作用。为进一步考察药物活性成分与DNA结合特性，对活性成分与mtDNA间竞争性结合进行了研究。防己诺林碱（被竞争试剂）浓度为125μg/mL，粉防己碱（竞争试剂）浓度递增，它们在125μg/mL以内是协同关系，能促进彼此与DNA结合；当粉防己碱（竞争试剂）的浓度继续增加，二者与mtDNA的结合率均呈下降趋势，说明此时二者是竞争关系。当粉防己碱（被竞争试剂）浓度为125μg/mL，防己诺林碱（竞争试剂）浓度由50μg/mL逐渐增加时，粉防己碱（被竞争试剂）防己诺林碱（竞争试剂）与mtDNA相互作用的结合率均波动，无明显的竞争和协同关系，但基本保持一致趋势。同理，被竞争试剂（香豆素）的浓度100μg/mL，竞争试剂（对羟基苯乙酮）浓度当竞争试剂的浓度由50μg/mL增加至100μg/mL时，竞争试剂（对羟基苯乙酮）和被竞争试剂（香豆素）与mtDNA相互作用的结合率都显著增加，说明它们在100μg/mL以内是协同关系，能促进彼此与DNA结合；当竞争试剂的浓度继续增加，二者与mtDNA的结合率均呈下降趋势，说明此时二者是竞争关系。被竞争试剂（对羟基苯乙酮）与mtDNA相互作用的结合率都逐渐增加至趋于平缓，而竞争试剂（香豆素）一直保持平缓趋势，说明香豆素的浓度增加能促进对羟基苯乙酮与DNA结合。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-5
目录  5-7
1 绪论  7-15
  1.1 引言  7-8
  1.2 小分子与生物大分子相互作用  8-12
    1.2.1 小分子活性物质与脱氧核糖核酸（DNA）的相互作用  9-10
    1.2.2 小分子药物与 DNA 相互作用的方式  10-11
    1.2.3 小分子药物与 DNA 相互作用的研究方法  11-12
  1.3 药物小分子与生物大分子相互作用在药物研究中的应用  12-14
  1.4 研究目的及意义  14-15
2 防己、茵陈、丹参滴丸的定性定量分析  15-30
  2.1 引言  15-16
  2.2 实验部分  16-19
    2.2.1 试剂材料与仪器设备  16-17
    2.2.2 实验条件与方法  17-19
  2.3 结果与讨论  19-28
    2.3.1 色谱条件选择  19-22
    2.3.2 防己的定性定量分析  22-24
    2.3.3 茵陈的定性定量分析  24-27
    2.3.4 丹参滴丸的定性定量分析  27-28
  2.4 结论  28-30
3 微超滤-HPLC 分析中药活性成分与 DNA 相互作用  30-50
  3.1 引言  30-31
  3.2 实验部分  31-32
    3.2.1 试剂材料与仪器设备  31
    3.2.2 ct-DNA、大鼠肝脏 DNA、大鼠肝脏 mtDNA 的制备  31-32
    3.2.3 对照品溶液配制  32
    3.2.4 结合率的计算  32
  3.3 结果与讨论  32-48
    3.3.1 DNA 及纯度鉴定  32-33
    3.3.2 DNA 使用前处理  33-34
    3.3.3 药物与 DNA 相互作用结合率的测定  34-46
    3.3.4 紫外-可见光谱法测定药物与 DNA 相互作用  46-47
    3.3.5 方法可行性考察  47-48
  3.4 结论  48-50
4 微超滤-HPLC 法用于药物与 DNA 相互作用竞争性考察  50-57
  4.1 引言  50
  4.2 实验部分  50-51
    4.2.1 试剂与材料  50
    4.2.2 仪器设备  50-51
  4.3 结果与讨论  51-55
    4.3.1 药物与 mtDNA 相互作用的竞争性考察  51-54
    4.3.2 药物与 mtDNA 相互作用实验中的微超滤回收率测定  54-55
  4.4 结论  55-57
5 总结  57-60
参考文献  60-64
攻读学位期间发表的学术论文  64-67
致谢  67

防己等中药活性成分与DNA相互作用的研究

内容摘要

全文目录

相似论文