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林可霉素中试发酵工艺的优化

作　者: 钟益清
导　师: 王筱兰
学　校: 江西师范大学
专　业: 生物化工
关键词: 林可霉素发酵分批补料发酵效价
分类号: TQ465
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

林可霉素是由林克链霉菌产生的广谱抗生素，对大多数革兰氏阳性菌有较好的抗菌活性。林可霉素具有耐药性发展缓慢、组织渗透性好、对呼吸系统感染等有较好的疗效，因此林可霉素被广泛用于临床治疗。在青霉素等其它抗生素的耐药菌逐渐被发现，导致这些抗生素使用受限制的情况下，林可霉素需求量在逐渐增加。而国内工业发酵生产林可霉素的生产水平有限，发酵效价不高，因此如何提高林可霉素发酵效价是林可霉素研究的一个热点。研究人员通过基因工程等手段改造林可霉素产生菌，促进林可霉素生产，而经过改造后的菌种稳定性差、生产机理不明确，不能马上应用于生产，提高发酵效价；林可霉素生产企业主要通过发酵工艺改良来提高产量，但是工业生产过程复杂、影响因素众多且不易控制、实验成本高，导致直接在生产上进行改良成果较少。本文在实验室水平模拟工业生产过程，对林可霉素发酵过程进行调控，改良生产工艺。通过对林可霉素补料工艺的研究发现：林可霉素发酵培养中、后期补料有利于延缓菌体衰老，葡萄糖、硫酸铵补料为林可霉素发酵提供基础营养物质，小料补料可以为发酵提供其它必需的营养物质，通过48h和96h小料补料和葡萄糖、硫酸铵补料可以使发酵生物效价从无补料的3851μg/mL提高到7421μg/mL，高于工业生产水平。本文还对二级种进行研究，发现发酵培养过程中二级种接种量对发酵效价无影响，而其“菌龄”对发酵效价有影响。另外，本文还采用细豆饼粉进行发酵培养，研究其影响，发现使用细豆饼粉进行林可霉素发酵的最终效价要高于使用普通豆饼粉的实验批次，但其效果不显著。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
引言  8-9
1 绪论  9-15
  1.1 林可霉素简介  9-10
  1.2 林可霉素发酵生产现状  10-11
  1.3 林可霉素发酵调控工艺及研究进展  11-12
  1.4 林可霉素提取过程  12-13
  1.5 林可霉素的作用及滥用抗生素的危害  13-14
  1.6 本课题研究意义及研究内容  14-15
2 实验器材与检测方法  15-25
  2.1 仪器与试剂  15-16
  2.2 发酵效价的检测  16-17
    2.2.1 检测原理  16
    2.2.2 测定步骤  16-17
    2.2.3 测定注意事项  17
  2.3 总糖与还原糖的测定  17-20
    2.3.1 测定原理  18
    2.3.2 试剂配制  18
    2.3.3 制备标准曲线  18-19
    2.3.4 还原糖测定  19-20
    2.3.5 总糖测定  20
  2.4 游离氨基氮的测定  20-22
    2.4.1 检测原理  20-21
    2.4.2 配制试剂  21
    2.4.3 制作标准曲线  21-22
    2.4.4 测定发酵液中的氨基氮含量  22
  2.5 发酵液溶解磷含量测定  22-24
    2.5.1 检测原理  22
    2.5.2 配制试剂  22-23
    2.5.3 制作对照表  23-24
    2.5.4 测定发酵液中的溶解磷的含量  24
  2.6 细胞湿重检测及菌体形态观察  24-25
3 糖、氮补料与过程控制  25-31
  3.1 菌种与培养基  25-26
  3.2 分析方法  26
  3.3 培养条件和发酵过程  26
    3.3.1 培养条件  26
    3.3.2 发酵培养过程  26
  3.4 结果与讨论  26-31
    3.4.1 无补料工艺林可霉素发酵情况  26-27
    3.4.2 葡萄糖、硫酸铵补料工艺和 pH 调控  27-29
    3.4.3 葡萄糖、硫酸铵补料工艺对发酵效价的影响  29-30
    3.4.4 讨论  30-31
4 二级菌种对林可霉素发酵的影响  31-36
  4.1 菌种与培养基  31-32
  4.2 分析方法  32
  4.3 培养条件和发酵过程  32-33
    4.3.1 发酵罐培养过程及培养条件  32
    4.3.2 补料工艺和过程控制  32-33
  4.4 结果与讨论  33-36
    4.4.1 接种量对林可霉素发酵的影响  33
    4.4.2 接种“菌龄”对林可霉素发酵的影响  33-35
    4.4.3 讨论  35-36
5 小料补料工艺的研究  36-42
  5.1 菌种与培养基  36-37
  5.2 分析方法  37
  5.3 发酵过程和培养条件  37
  5.4 补料工艺和过程控制  37-38
  5.5 结果与讨论  38-42
    5.5.1 不同时间一次补小料对发酵过程效价的影响  38-40
    5.5.2 不同时间二次补小料对发酵过程效价的影响  40-41
    5.5.3 讨论  41-42
6 豆饼粉精细程度对林可霉素发酵的影响  42-47
  6.1 菌种与培养基  42-43
  6.2 分析方法  43
  6.3 培养条件和发酵过程  43
  6.4 补料工艺和过程控制  43-44
  6.5 结果与讨论  44-47
    6.5.1 采用细豆饼粉的发酵过程控制  44-45
    6.5.2 采用细豆饼粉发酵的发酵效价变化  45-46
    6.5.3 讨论  46-47
7 结论  47-48
参考文献  48-52
致谢  52-53
在读期间公开发表论文（著）及科研情况  53

林可霉素中试发酵工艺的优化

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