学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

羟基喜树碱对大鼠肝纤维化防治作用及部分机制的研究

作　者: 邵佳亮
导　师: 胡国信
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 肝纤维化肝星状细胞羟基喜树碱 Bax Bcl-2
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 33次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：观察HCPT对肝纤维化大鼠肝功能、纤维化程度等影响,研究HCPT对肝纤维化大鼠模型的防治作用；检测肝组织中Bax、Bcl-2基因表达、a-SMA蛋白表达、TUNEL染色等指标,初步探讨HCPT抗大鼠肝纤维化的作用机制。为肝纤维化的治疗探索新途径提供实验基础；为拓宽HCPT的临床应用范围提供理论依据。方法：64只SD大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量HCPT治疗组、中剂量HCPT治疗组、高剂量HCPT治疗组共5组。采用40% CCl4花生油溶液0.2ml/100g,2次/周诱导大鼠肝纤维化模型。正常组给予生理盐水1 ml/kg腹腔注射,每周2次；模型组仅给予CCl4造模；其余3组造模同时分别给予0.25mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kgHCPT腹腔注射每周3次,共8周。各组分别在实验的第8周末进行以下指标检测：①采用全自动生化仪检测各组大鼠血清ALT、AST、ALB、TP、A/G；②采用全自动血球分析仪检测大鼠血白细胞、血小板；③取肝脏相同部位用于石蜡切片,分别进行HE染色、Masson三色染色,对病理标本进行纤维化程度分期；④对肝脏组织石蜡切片进行a-SMA免疫组织化学检测,并进行TUNEL染色；⑤取肝脏相同部位采用RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2 mRNA表达以及Bax/Bcl-2mRNA比值的变化。结果：1.各组肝功能：模型组的ALT、AST与正常组相比均明显升高(P值均<0.05),各HCPT治疗组与模型组相比均明显下降(P值均<0.05)；模型组的ALB、A/G与正常组相比均明显降低(P值均<0.05),而各HCPT治疗组与模型组相比均明显升高(P值均<0.05)。2.各组血WBC、PLT检测：正常组WBC明显高于其他各组(P值均<0.05),而模型组与各治疗组间差异无统计学意义(P值均>0.05)；PLT检测仅正常组与模型组有统计学差异(P<0.05),其他各组间差异无统计学意义(P值均>0.05)。3.各组肝脏大体形态观察：正常组大鼠肝脏外观红润光滑,边缘锐利,质地柔软；模型组肝脏体积显著缩小,与肝周组织粘连严重,表面凹凸不平,肝叶边缘粗顿,质地较硬；各HCPT治疗组肝脏体积均大于模型组,表面略有灰暗,未见有明显增生结节,质地尚柔软。4.病理切片HE及Masson染色和肝纤维化病理分期：①病理组织学观察：正常组肝小叶结构完整,无纤维增生,无炎症细胞侵润；模型组肝小叶结构紊乱,小叶被纤维分割,较多假小叶形成,并有较多炎症细胞侵润,同时可见肝细胞气球样变及大泡性脂肪变性；各剂量HCPT治疗组较模型组明显改善,肝小叶结构较清晰,纤维组织不同程度增生以汇管区明显,无明显假小叶形成,仅于汇管区周围见部分肝细胞脂肪变性,为大小泡混合性脂肪变性,可见少量炎症细胞侵润。②各组肝纤维化病理分期：模型组的肝纤维化程度与正常组相比明显升高(P<0.05)；各HCPT治疗组与模型组相比均明显下降(P值均<0.05)；而中、高剂量组优于低剂量组(P值均<0.05)；中、高剂量治疗组间比较无明显统计学差异(P>0.05)。5. RT-PCR检测肝组织Bax、Bcl-2mRNA表达：模型组的Bax、Bcl-2mRNA与正常组相比均明显升高(P值均<0.05),而各HCPT治疗组与模型组相比均明显下降(P值均<0.05)。Bax/Bcl-2mRNA比值,模型组低于各HCPT治疗组(P值均<0.05),而各治疗组中以中剂量组最高(P值均<0.05)。6.免疫组织化学检测大鼠肝脏a-SMA的表达：模型组a-SMA除与低剂量治疗组外与其他各组差异均有统计学意义(P值均<0.05),而中、高剂量治疗组间比较无明显统计学差异(P>0.05)。7.肝组织TUNEL染色：TUNEL染色显示阳性着色细胞主要集中于肝脏组织汇管区,以纤维间隔中最为明显,其分布情况与a-SMA蛋白免疫组织化学染色区域一致；而肝细胞未见明显染色。结论：HCPT对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型具有防治作用；HCPT作用机制可能为HCPT抑制a-SMA蛋白的表达,抑制HSCs活化增值；上调Bax/ Bcl-2mRNA比值,诱导HSCs凋亡,从而改善了肝纤维化进程,达到了抗肝纤维化的治疗效果；同时本研究采用HCPT的给药剂量、给药途径、给药间隔等是安全、可行的；对HCPT防治其他组织器官纤维化(如肺纤维化等)的研究具有借鉴意义。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-11
第1章前言  11-13
第2章材料与方法  13-23
  2.1 材料  13-14
    2.1.1 实验动物与饲料  13
    2.1.2 主要试剂  13
    2.1.3 主要仪器  13-14
  2.2 研究方法  14-22
    2.2.1 主要溶液的配置  14-15
    2.2.2 实验动物模型的制备、分组以及药物处理  15
    2.2.3 标本获取与处理  15-16
    2.2.4 检测大鼠肝功能、白细胞、血小板指标  16
    2.2.5 观察大鼠肝脏大体形态、肝组织病理组织学以及肝纤维化的病理分期  16-17
    2.2.6 免疫组织化学检测肝组织α-SMA表达  17-18
    2.2.7 肝脏组织切片TUNEL染色  18-20
    2.2.8 RT-PCR检测肝组织Bax/Bcl-2 mRNA表达  20-22
  2.3 统计方法  22-23
第3章结果  23-37
  3.1 HCPT对肝纤维化大鼠肝功能的影响  23-25
    3.1.1 HCPT对肝纤维化大鼠ALT、AST的影响  23-24
    3.1.2 HCPT对肝纤维化大鼠ALB、TP、A/G的影响  24-25
  3.2 HCPT对大鼠血液白细胞、血小板的影响  25-26
  3.3 HCPT对大鼠肝脏大体形态、病理组织学以及病理分期的影响  26-31
    3.3.1 HCPT对大鼠肝脏大体形态的影响  26-27
    3.3.2 HCPT对大鼠肝脏病理组织学的影响  27
    3.3.3 HCPT对大鼠肝组织纤维化分期的影响  27-31
  3.4 HCPT对肝纤维化大鼠肝组织α-SMA表达影响  31-33
  3.5 肝组织TUNEL染色  33-35
  3.6 HCPT对肝纤维化大鼠肝组织Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响  35-37
第4章讨论  37-43
  4.1 羟基喜树碱与纤维化疾病  37
  4.2 HCPT给药途径、给药剂量、给药间隔及安全性探讨  37-39
  4.3 HCPT对肝纤维化大鼠模型的防治作用  39-40
  4.4 HCPT抗实验性肝纤维化的机制探讨  40-43
第5章结论与展望  43-45
  5.1 结论  43
  5.2 展望  43-45
致谢  45-46
参考文献  46-49
攻读学位期间的研究成果  49-50
综述  50-58
  参考文献  55-58

羟基喜树碱对大鼠肝纤维化防治作用及部分机制的研究

内容摘要

全文目录

相似论文