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苎麻微卫星引物开发

作　者: 龙珠
导　师: 彭定祥
学　校: 华中农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 苎麻微卫星磁珠基因文库
分类号: S563.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 27次
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内容摘要

苎麻分子标记育种发展迅速,本研究采用核酸数据库搜索法与磁珠探针杂交富集法分离了41个苎麻微卫星序列。利用Primer premier5.0和SSRHunter1.3软件设计了41对苎麻微卫星引物。主要结果如下：1.本研究从320条表达序列标签核酸数据库搜索,设计了相对应的微卫星引物。全面搜索NCBI中苎麻表达序列标签数据库,从320条表达序列中发现了19条符合选择标准含SSR序列,设计19对SSR引物。2.实验中用到了生物素标记探针(AG)15来杂交扩增后的基因组片段,再用磁珠吸附的方法富集构建微卫星序列文库,最后对阳性克隆进行筛选,其中有300-700bp的克隆28个,可以作为测序目标,微卫星片段的含有率很高,但有6个克隆微卫星位点不符合引物设计的基本要求,没有设计出合适引物,所以开发了22对微卫星引物,开发效率也很理想。在实验中使用了不同的方法来分离微卫星片段,虽然各个方法都有所收获但是并不精通,但总结出了几种方法的精华。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
中英文缩写词  7-8
1 文献综述  8-18
  1.1 分子标记技术的发展  8-10
  1.2 微卫星标记在作物种质资源中的应用  10-12
    1.2.1 遗传多样性分析  10-11
    1.2.2 遗传图谱的构建  11
    1.2.3 种质创新与植物育种  11-12
  1.3 SSR分离鉴定研究进展  12-18
    1.3.1 经典的SSR序列分离方法  12-13
    1.3.2 采用富集分离的策略  13-17
    1.3.3 从数据库中搜索  17-18
2 材料与方法  18-25
  2.1 数据库中含SSR序列的搜索  18-19
    2.1.1 引物设计原则  18-19
    2.1.2 引物设计参数  19
  2.2 探针杂交磁珠富集法  19-25
    2.2.1 植物DAN的制备  19-20
    2.2.2 苎麻微卫星的分离  20-25
3 结果与分析  25-30
  3.1 通过数据库开发引物结果  25-26
  3.2 磁珠法分离结果  26-30
    3.2.1 基因组DNA酶切  26
    3.2.2 苎麻微卫星序列的筛选结果  26-27
    3.2.3 磁珠富集微卫星片段与测序  27-30
4 讨论  30-32
  4.1 EST序列中微卫星序列的搜索与引物设计  30-31
  4.2 磁珠富集法微卫星特异引物设计结果分析  31-32
  4.3 研究展望  32
5 结论  32-34
参考文献  34-40
致谢  40

苎麻微卫星引物开发

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