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燕麦EMS突变体库的建立及β-葡聚糖合成关键基因AsCsLF6的Tilling分析

作　者: 张娜
导　师: 胡银岗
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: EMS TILLING 燕麦 β-葡聚糖合成 AsCsLF6
分类号: S512.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

定向诱导基因组局部突变(Tilling)是检测生物群体相关基因等位变异的高通量反向遗传学研究方法,能够快速有效的识别出目的基因的差异位点。本研究采用化学诱变技术创建了燕麦的EMS突变体库,对其M2代突变体株系的形态特征进行调查鉴定,并采用内含子切结点引物和长随机引物的PCR标记分析M2代突变群体的突变体株系间与株系内的遗传变异。同时,采用琼脂糖凝胶Tilling技术对燕麦突变群体中β-葡聚糖合成关键基因AsCsLF6部分区段的等位变异进行了检测,并对燕麦VRN基因进行了克隆。主要结果如下:(1)对突变体群体的表型与分子标记分析表明,突变群体M2代株系间和株系内均表现出了丰富的遗传变异,表型变异的总频率为7.17%。采用15个内含子切接点引物和长随机引物对其中39个突变体株系的195个单株进行标记分析,共扩增出99条谱带,其中多态性条带65条,多态性条带比率为65.7%。突变体株系间的遗传相似系数在0.667～0.973之间,表现出丰富的遗传变异。(2)采用琼脂糖凝胶Tilling技术,对燕麦突变体材料的β-葡聚糖合成关键基因AsCsLF6进行了SNP检测。结果显示,每个DNA混合池中的酶切片段与野生型一致,未检测到该基因的突变体。(3)对燕麦VRN基因的克隆,获得了676bp的基因组片段,分析表明与小麦VRN-A1基因的相似性高达92%,含有VRN-A1基因的MADS和K-box保守结构域。

燕麦EMS突变体库的建立及β-葡聚糖合成关键基因AsCsLF6的Tilling分析

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