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Periostin在平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及阿托伐他汀的影响

作　者: 李静乐
导　师: 杨侃
学　校: 中南大学
专　业: 心血管内科学
关键词: Periostin 平滑肌细胞增殖迁移阿托伐他汀
分类号: R965
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的观察Periostin (Pn)在大鼠颈动脉损伤后的表达情况及其与动脉内膜增生过程的关系以及体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞在TGF-p1刺激下Pn的表达情况及其与平滑肌细胞迁移、增殖等活动的关系；观察阿托伐他汀对上述过程的影响并初步探讨其抑制Pn表达的分子机制。为防治血管重塑及增生性血管疾病提供治疗新靶点。方法采用通气-干燥法损伤大鼠右侧颈总动脉制备动物模型。45只大鼠随机分成正常对照组(不行手术)和阿托伐他汀组、模型对照组,分别于术后1周、2周、4周各处死大鼠5只取右颈总动脉标本,采用组织形态学检测内膜增生；采用免疫组织化学染色和RT-PCR观察血管组织Pn的表达。采用组织块贴壁培养法进行血管平滑肌细胞的原代培养,取3-6代细胞用于实验。采用10ng/mlTGF-β1刺激VSMC,并用不同浓度阿托伐他门(0.1umol/L.1.0umol/L、10.0umol/L)干预,24小时后用RT-PCR及Western-blot法检测VSMC中Pn mRN和蛋白的表达；用Boyden趋化小室测试细胞迁移情况,用MTT法测定细胞增殖情况。原代培养大鼠主动脉SMC,采用lOng/ml TGF-β1刺激VSMC,分别加入10umol/L阿托伐他汀、MVA及10umol/L阿托伐他汀、Rho激酶抑制剂Y-27632,24小时后用RT-PCR及Western-blot法检测VSMC中PnmRN和蛋白的表达。结果(1)正常对照组血管各时间段内膜无明显变化。与正常对照组血管比较,大鼠颈动脉损伤后1周、2周、4周新生内膜增生明显,内膜面积及内/中膜面积比值增加。(2)正常对照组血管各时间段未见明显Pn表达。与正常对照组血管比较,大鼠颈动脉损伤后1周、2周、4周Pn表达明显增加。(3)阿托伐他汀组2周、4周Pn表达和内膜面积、内/中膜面积比值与模型对照组比较明显减少。(4)大鼠VSMC在TGF-β1刺激下Pn表达明显增加,且VSMC迁移率及增殖率显著增加。Pn抗体可明显抑制TGF-β1诱导的VSMC的迁移和增殖。(5)阿托伐他汀明显减少大鼠VSMC在TGF-β1诱导下的Pn表达,显著抑制VSMC的迁移率及增殖率,且呈浓度依赖性。(6)Rho激酶抑制剂Y-27632可明显减少大鼠VSMC在TGF-β1诱导下的Pn表达,作用与阿托伐他汀类似。(7)加入MVA后,阿托伐他汀对TGF-β1诱导大鼠VSMC中Pn表达的抑制作用明显降低。结论(1)Pn可促进平滑肌细胞增殖和迁移,在动脉损伤后内膜增生过程中起重要作用。(2) TGF-β1可通过Rho/Rho激酶信号通路促进血管平滑肌细胞中的Pn表达。(3)阿托伐他汀可能是通过抑制MVA等类异戊二烯的生成,阻断Rho/Rho激酶信号通路,进而抑制’TGF-β1诱导的VSMC中的Pn表达。(4)阿托伐他汀可能通过抑制Pn而抑制平滑肌细胞的增殖和迁移及大鼠动脉损伤后的内膜增生。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
目录  9-10
英文縮略词表  10-11
前言  11-12
第一章 Periostin在大鼠颈动脉损伤后的表达及阿托伐他汀的影响  12-28
  材料与方法  12-18
  结果  18-22
  彩图  22-24
  讨论  24-27
  结论  27-28
第二章阿托伐他汀对TGF-β1诱导大鼠动脉平滑肌细胞  28-46
  材料与方法  28-37
  结果  37-43
  讨论  43-45
  结论  45-46
第三章阿托伐他汀抑制大鼠平滑肌细胞Periostin表达的机制初探  46-60
  材料与方法  46-54
  结果  54-57
  讨论  57-59
  结论  59-60
总结论  60-61
第一章参考文献  61-64
第二章参考文献  64-67
第三章参考文献  67-70
综述一  70-79
  参考文献  74-79
综述二  79-91
  参考文献  83-91
致谢  91

Periostin在平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及阿托伐他汀的影响

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