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奥曲肽抑制SW480细胞Wnt/β-Catenin通路的关键靶点：GSK-3β

作　者: 蒋忠军
导　师: 梁庆模
学　校: 南华大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 奥曲肽 GSK-3β 氯化锂 增殖 Wnt信号通路
分类号: R73-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


实验目的:本实验拟通过氯化锂（GSK-3β抑制剂）预处理前后，比较奥曲肽对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的变化以及对Wnt/β-Catenin信号通路中β-Catenin、GSK-3β蛋白的表达差异，进一步阐明奥曲肽的抗肿瘤机制及在该通路的药物靶点。实验方法：以体外培养人结肠癌SW480细胞株作为实验研究对象，实验分为六组：A组-对照组（PBS）；B组-奥曲肽（OCT10-8M）；C组-奥曲肽（OCT10-10M）；D组-氯化锂（LiCl20mM）；E组-奥曲肽+氯化锂（OCT10-8M+LiCl20mM）；F组-奥曲肽+氯化锂（OCT10-10M+LiCl20mM）。MTT法筛选氯化锂的干预浓度；MTT法测定各实验组细胞的增殖抑制率情况；FCM法测定各实验组细胞凋亡率及细胞周期的情况；Western blot法检测各实验组细胞中非磷酸化β-Catenin、非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达的情况。实验结果：1.MTT法筛选氯化锂(LiCl)的有效干预浓度显示：2000mM、200mM LiCl能抑制SW480细胞增殖（P＜0.05）；而2mM LiCl在48h能促进该细胞增殖（P＜0.05），其他时间段未对细胞产生明显的生物学效果（P＞0.05）；而20mM氯化锂在三个时间段均未见明显的细胞增殖促进或者抑制效果（P＞0.05）。故选取20mMLiCl作为本实验有效干预浓度。2. MTT法测定各实验组细胞的增殖抑制率显示：B、C组SW480细胞增殖抑制率上升（较A组P＜0.05），且两组间有差异性，48h抑制率最大（P＜0.05）；E、F组分别较B、C组细胞增殖抑制率下降（P＜0.05），但是两组间未见差异性（P＞0.05）。3.FCM结果显示：B、C组SW480细胞凋亡率上升，且组间有差异性，而且G0/G1期细胞增多（较A组P＜0.05）；E、F组分别较B、C组细胞凋亡率下降（P＜0.05），G0/G1期细胞数未见明显差异性（P＞0.05）。4.1Western blot结果显示：B、C组非磷酸化β-Catenin蛋白表达明显下调（较A组P＜0.05），组间亦有差异性（P＜0.05）；E、F组非磷酸化β-Catenin蛋白表达明显上调（分别与B、C组比较P＜0.01），但组间无显著差异性（P＞0.05）；D组非磷酸化β-Catenin蛋白表达上调（较A组P＜0.05）。4.2Western blot结果显示：B、C组非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达明显上调（较A组P＜0.01），组间亦有差异（P＜0.05）；E、F组非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达下调（分别与B、C组比较P＜0.05），但组间比较无显著性差异（P＞0.05）；D组非磷酸化GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达下调（较A组P＜0.05）。4.3Western blot结果显示：B、C组p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达有明显下调作用（较A组P＜0.05），组间亦有差异性（P＜0.05）；E、F组p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达上调（分别与B、C组比较P＜0.05），但组间无显著性差异（P＞0.05）；D组p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达上调（较A组P＜0.05）。结论：1.奥曲肽能体外抑制结肠癌SW480细胞增殖和诱导其凋亡，并使其细胞周期受阻于G0/G1期；抑制GSK-3β活性可以减弱奥曲肽的抗癌效果。2.奥曲肽对Wnt/β-Catenin信号通路的抑制作用，是通过激活GSK-3β的活性阻止信号传递实现的。

全文目录


中英文缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-14
一 材料和方法  14-23
二 统计学处理  23-24
三 技术路线图  24-25
四 实验结果  25-34
讨论  34-40
结论  40-41
参考文献  41-45
综述  45-55
  参考文献  50-55
攻读硕士学位期间完成、发表论文情况  55-56
致谢  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究
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