学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

WDR26在系统性硬化症皮肤成纤维细胞中的表达及作用的初步研究

作　者: 蒋莹
导　师: 左晓霞
学　校: 中南大学
专　业: 风湿免疫学
关键词: 系统性硬化症 WDR26 TGF-β 成纤维细胞
分类号: R593
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
下　载: 61次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：研究WDR26在系统性硬化症(systemic sclerosis, SSc)患者及正常人皮肤成纤维细胞中的表达,以及WDR26在转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)刺激的皮肤成纤维细胞中的表达及作用。方法：①采用Western-blot检测SSc患者及正常人皮肤成纤维细胞中WDR26蛋白的表达差异。②以不同浓度TGF-β(0,0.1,1.0,5.0,10.0ng/ml)刺激SSc患者和正常人皮肤成纤维细胞或同一浓度TGF-β(10ng/ml)刺激成纤维细胞不同时间(0,6,12,24,48小时)后,用Real-time PCR检测成纤维细胞中WDR26mRNA的表达变化,研究TGF-β对成纤维细胞中WDR26表达的影响。③在正常人成纤维细胞中过表达或低表达WDR26,分别用TGF-β(10ng/ml)刺激,Real-time PCR检测：a.成纤维细胞中细胞外基质Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、纤连蛋白(FN)mRNA的表达,研究WDR26对TGF-β诱导的成纤维细胞中细胞外基质生成的影响；b.成纤维细胞中TGF-p信号通路蛋白SMAD3mRNA的表达,对WDR26在成纤维细胞TGF-β通路中的作用机制进行初步探索。结果：①SSc患者皮肤成纤维细胞中WDR26蛋白表达较正常人增多。②TGF-β(10ng/ml)刺激48小时后,正常人成纤维细胞表达WDR26蛋白明显增高。采用不同浓度TGF-p刺激成纤维细胞或同一浓度TGF-p刺激成纤维细胞不同时间后,随着刺激浓度的增加和刺激时间的延长,SSc和正常人的成纤维细胞中WDR26mRNA的表达均呈先增高后降低的趋势；正常人成纤维细胞较SSc患者表达WDR26mRNA多,且变化的速度更快,两者的表达在48小时趋于接近。③通过在成纤维细胞中过表达或低表达WDR26,我们发现过表达WDR26可抑制TGF-p诱导的成纤维细胞中COL1A1mRNA的表达,而低表达WDR26可促进TGF-p诱导的成纤维细胞中COL1A1mRNA的表达；低表达WDR26时,成纤维细胞中SMAD3mRNA表达降低,过表达WDR26时,成纤维细胞中SMAD3mRNA的表达也降低,SMAD3mRNA的表达随着WDR26表达水平的增高呈先增高后降低的趋势。结论：①SSc患者皮肤成纤维细胞中WDR26表达较正常人增多。②TGF-p可诱导皮肤成纤维细胞中WDR26表达。③WDR26能抑制TGF-β诱导的成纤维细胞中细胞外基质COL1A1mRNA的表达,对TGF-β介导的纤维化起保护作用。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
第一章 前言  10-14
第二章 材料与方法  14-27
  1. 材料  14-17
    1.1 细胞系  14
    1.2 主要试剂及来源  14-15
    1.3 主要实验仪器  15-16
    1.4 引物序列  16
    1.5 主要试剂的配制  16-17
  2. 方法  17-27
    2.1 细胞实验  17-20
    2.2 细胞总RNA的提取  20
    2.3 实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)  20-23
    2.4 细胞总蛋白的提取  23
    2.5 蛋白质考马斯亮蓝染胶  23-24
    2.6 蛋白质浓度的测定  24
    2.7 免疫印迹分析(Western-blot analysis)  24-26
    2.8 统计学分析  26-27
第三章 实验结果  27-38
  1. WDR26蛋白在系统性硬化症患者及正常人皮肤成纤维细胞中的表达  27
  2. TGF-β对成纤维细胞WDR26表达的影响  27-30
  3. 过表达WDR26对成纤维细胞中细胞外基质生成的影响  30-33
  4. 低表达WDR26对成纤维细胞中细胞外基质生成的影响  33-36
  5. 过表达或低表达WDR26的成纤维细胞中SMAD3 mRNA的表达  36-38
第四章 分析与讨论  38-42
第五章 结论  42-43
参考文献  43-49
附表  49-53
综述  53-67
  参考文献  61-67
致谢  67-69
攻读学位期间主要的研究成果  69

相似论文

  1. GATA2与Smad4相互作用对TGFβ信号通路负调控的初步研究,R363
  2. 兔骨髓间充质干细胞分离培养及定向分化的研究,R329
  3. 经鼻给予转化生长因子-β1对氯化锂—匹罗卡品诱导的癫痫持续状态大鼠海马神经元的保护作用,R742.1
  4. 金钗石斛多糖减轻脂多糖诱导的大鼠学习记忆减退及机制研究,R285.5
  5. 长期高盐饮食诱导Wistar大鼠血管重构的机制及替米沙坦干预,R544.1
  6. 低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞,R329
  7. 转化生长因子β1及丁酸钠对大肠癌HCT-116细胞增殖影响的实验研究,R735.34
  8. 硅油填充继发青光眼患者前房液中生长因子含量变化的相关分析,R779.6
  9. 脂肪干细胞向成牙本质细胞分化的初步研究,R78
  10. SPC对人真皮成纤维细胞中MMP-1、MMP-2、MMP-3表达影响的研究,R751
  11. 蛇床子素对博莱霉素致肺纤维化动物的干预作用及其机制研究,R563.9
  12. 增生性瘢痕中CD90、Ⅰ、Ⅳ型胶原和TGF-βⅠ型、Ⅱ型受体表达的相关性分析,R622
  13. 腹膜透析患者血浆FGF-23与动脉粥样硬化和心脏结构、功能的相关性研究,R692.5
  14. 三氧化二砷对转化生长-β1因子诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响,R563.9
  15. 低功率激光对末端病大鼠跟腱Collagen-ImRNA、TGF-β1mRNA表达影响的实验研究,G804.2
  16. 羧甲基壳聚糖促进创伤愈合机理的研究,R644
  17. FGFR2基因单核苷酸多态性与乳腺癌的相关性研究,R737.9
  18. 6-O-羧甲基壳聚糖对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1以及CTGF表达的影响,R622
  19. 强脉冲光对TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的影响及ERK抑制剂的作用,R751
  20. 转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达,R737.31
  21. 新血府逐瘀软胶囊对高血压病患者PⅠCP、PCⅢ、TGF-β1及瘀血证候的影响,R259

中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病
© 2012 www.xueweilunwen.com