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弓形虫GRA1/MIC6双价核酸疫苗及亚单位疫苗的研究

作　者: 孙玲
导　师: 李淑红
学　校: 吉林大学
专　业: 病原生物学
关键词: 弓形虫核酸疫苗亚单位疫苗
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）简称弓形虫，是一种细胞内寄生原虫，具有人兽共患、机会性致病特点。弓形虫寄生于人体及动物有核细胞，造成多组织器官的损害，引起弓形虫病。孕妇感染后，还可出现流产、早产、畸形等不良妊娠结局和不孕[1]，在免疫功能低下者如艾滋病患者，是其致死的主要原因。弓形虫呈世界性分布，人、兽感染率均极高，给人类健康和经济社会发展带来了较大的影响。因此弓形虫病是医学领域重点防治的一种寄生虫病。为探索GRA1/MIC6基因对弓形虫感染的免疫保护性，本试验对基因GRA1、MIC6进行引物设计，将GRA1、MIC6基因及其串联基因与真核表达载体pVAX1及原核表达载体pET28-a相连，构建真核及原核表达载体。另外在两基因串联的基础上插入了CpG-ODN加强序列，分别与真核表达载体pVAX1及原核表达载体pET28-a相连。将质粒转染到Hela细胞中，用间接免疫荧光及Western blot方法验证在Hela内表达。将原核表达质粒导入大肠杆菌，表达出重组的蛋白。将核酸疫苗、亚单位疫苗分别对小鼠接种，进行免疫保护分析。结果：GRA1，MIC6基因得到有效扩增，经比对，与原基因序列同源性为100%。将真核质粒转染Hela细胞后，得到特异蛋白。Western blot试验证实该蛋白有反应原性。将核酸疫苗对BALB/c小鼠免役，试验组血清中IgG抗体滴度及CD4+T、CD8+T淋巴细胞数值与对照组相比差异显著（p<0.01），其中pVAX1-C-MIC6-GRA1组IgG抗体滴度和CD4+T淋巴细胞数值与pVAX1-GRA1和pVAX1-MIC6组相比差异显著（p<0.05）。ELISA测定小鼠血清IFN-γ和IL-2细胞因子水平，试验组与对照组相比差异显著（p<0.01），pVAX1-C-MIC6-GRA1组血清IFN-γ和IL-2细胞因子水平均高于其它试验组。弓形虫感染攻击小鼠后pVAX1-C-MIC6-GRA1组小鼠平均生存时间最长，达到（13.7±1.34）d，较对照组小鼠（5d内全部死亡）相比显著延长。用亚单位疫苗免疫BALB/c小鼠，试验组血清中IgG抗体滴度及CD4+T、CD8+T淋巴细胞数值与对照组相比差异显著（p<0.01），ELISA测定小鼠血清IFN-γ和IL-2细胞因子水平，试验组与对照组相比差异显著（p<0.01），其中C-MIC6-GRA1重组蛋白组IgG抗体滴度和CD4+T淋巴细胞数值与GRA1和MIC6重组蛋白组相比差异显著（p<0.05），血清IFN-γ和IL-2细胞因子水平均高于其它试验组。弓形虫感染攻击小鼠后C-MIC6-GRA1重组蛋白组小鼠平均生存时间最长，达到（13.4±1.26）d，较对照组（5d内全部死亡）明显延长。

弓形虫GRA1/MIC6双价核酸疫苗及亚单位疫苗的研究

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