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小鼠IRF-3基因核心启动子的鉴定及其调控元件的初步鉴定

作　者: 刘立飞
导　师: 周国平
学　校: 南京医科大学
专　业: 儿科学
关键词: mIRF-3 启动子转录调控 Egr2 YY1
分类号: R34
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：克隆小鼠干扰素调节因子3（murine Interferon regulatory factor3，mIRF-3）基因启动子并寻找其核心功能区域，鉴定与mIRF-3基因启动子结合的转录因子，为阐明其表达调控机制奠定基础。方法：以小鼠NIH3T3细胞DNA为模板，采用PCR方法获取mIRF-3基因5’侧翼序列，测序正确后插入pGL3-Basic载体。运用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定其启动子活性。采用缺失分析法分别从mIRF-3基因5’侧翼的5’端逐段缺失，克隆得到不同长度的截短片段，插入pGL3-Basic载体，使用双荧光素酶检测系统定位mIRF-3基因启动子核心功能区域，鉴定其启动子活性。利用点突变技术、染色质免疫沉淀（ChIP）和RNA干扰等实验，分析mIRF-3核心启动子区域的转录因子结合位点。结果：核酸序列测定结果显示，克隆到的mIRF-3基因5’侧翼序列与Genbank中记录完全一致，荧光素酶活性分析结果表明其在NIH3T3细胞中具有较强的启动子活性。结果表明，自5’端缺失的截短片段其活性与pGL3-Basic相比，表现为先升高后降低，-301～+1bp截短片段表现出接近最高的启动子活性，而-196～+1bp截短片段的活性基本消失，提示mIRF-3的核心启动子区域位于-301～-196bp之间。并且-301/-196区域间可能存在核心调控元件。生物信息学预测该区域包含了Sp1、IK1、E2F1、C-MYB、Egr2和YY1等结合位点。点突变结果表明Egr2和YY1具有维持mRF-3的基本转录活性的作用。RNA干扰实验表明Egr2和YY1增强了mIRF-3的启动子活性。染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecitation，ChIP)实验结果表明YY1转录因子与mIRF-3的启动子区有结合。结论：mIRF-3基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-301与-196bp之间，Egr2和YY1在核心启动子调控方面具有关键的调控作用，且二者起正调控作用。

全文目录

英文缩略语词表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-14
第一部分小鼠 IRF-3 基因核心启动子的鉴定  14-34
  引言  14
  材料与方法  14-25
  结果  25-31
  讨论  31-34
第二部分小鼠 IRF-3 核心启动子调控元件的初步鉴定  34-58
  引言  34
  材料与方法  34-48
  结果  48-52
  讨论  52-58
结论  58-59
参考文献  59-69
综述  69-86
  参考文献  78-86
硕士在读期间科研工作小结  86-87
攻读学位期间发表文章情况  87-88
致谢  88

小鼠IRF-3基因核心启动子的鉴定及其调控元件的初步鉴定

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