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海藻酸盐支架修复RA软骨缺损的关键技术的实验研究

作　者: 张伊
导　师: 韦登明
学　校: 宁波大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 海藻酸盐骨髓间充质干细胞软骨组织工程修复佐剂性关节类风湿性关节炎
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

【目的】：应用骨髓间充质干细胞组织工程技术，以海藻酸盐作为支架，进行治疗类风湿性关节炎的动物实验研究。探讨海藻酸盐组织工程技术治疗类风湿性关节炎的可靠方法，通过动物实验研究海藻酸盐支架修复RA软骨缺损的关键技术。为临床应用该技术治疗RA提供实验基础和科学数据。【方法】：将新西兰长耳白兔分为正常对照组、佐剂性模型组和海藻酸盐支架治疗组。模型组和治疗组兔膝关节内注入弗氏完全佐剂建立佐剂性关节炎模型，对照组兔膝关节则注射等量生理盐水。取治疗组的骨髓，用percoll法分离出骨髓间充质干细胞，体外培养并传代，传至P3代用诱导培养液诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化，并制备好海藻酸盐支架。将诱导成功的软骨细胞与制作好的海藻酸盐支架混合注入治疗组的新西兰长耳白兔病变膝关节。对照组和模型组关节注射等量的生理盐水。治疗一个月后处死兔，观察正常组、治疗组、模型组的兔膝关节，取兔子的膝关节进行HE染色和免疫组织化学染色，观察海藻酸盐支架修复关节软骨的情况。【结果】：原代培养的骨髓间充质干细胞成梭形，漩涡状生长，诱导分化后的细胞呈现多角形，诱导成软骨的细胞经II型胶原免疫组化和阿利新蓝染色显阳性，并且RT-PCR检测有II型胶原mRNA表达。诱导成功的软骨细胞和制备完毕的支架混合，并测试支架的机械强度为20.05g/cm~2。组织形态学结果显示，治疗组与模型组比较，治疗组关节炎症反应明显减轻，软骨缺损得到明显修复。【结论】：以骨髓间充质干细胞为种子细胞，经过诱导分化为软骨细胞并制备海藻酸盐支架，可在一定程度上促进兔佐剂性关节炎软骨缺损的修复。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-11
1. 材料和方法  11-15
  1.1 实验动物  11
  1.2 主要材料和试剂  11-13
  1.3 主要仪器  13-14
  1.4 常用耗材  14-15
2. 实验方法  15-25
  2.1 实验动物分组及处理  15
  2.2 兔佐剂性关节炎模型制备  15
  2.3 骨髓间充质干细胞的提取与分离  15-16
  2.4 骨髓间充质干细胞的培养  16-18
  2.5 骨髓间充质干细胞的诱导结果鉴定  18-19
  2.6 海藻酸盐支架的制作与测试  19-20
  2.7 软骨组织固定、包埋和 HE 染色  20-22
  2.8 切片的 II 型胶原的免疫组织化学染色  22
  2.9 RT-PCR 检测培养细胞 II 型胶原 mRNA  22-24
  2.10 统计分析  24-25
3. 实验结果  25-33
  3.1 兔佐剂性关节炎模型制作结果  25
  3.2 MSC 细胞培养  25-27
  3.3 MSC 向软骨细胞诱导与鉴定  27-28
  3.4 RT-PCR 检测培养细胞 II 型胶原 mRNA 结果  28-29
  3.5 海藻酸盐支架制备  29-30
  3.6 兔膝关节 HE 染色结果  30-31
  3.7 兔膝关节组织 II 型胶原免疫组化染色结果  31-33
4. 讨论  33-36
5 实验小结  36-38
参考文献  38-42
附录 A 缩略词  42-43
附录 B 综述  43-52
  参考文献  50-52
在校研究成果  52-53
致谢  53

海藻酸盐支架修复RA软骨缺损的关键技术的实验研究

内容摘要

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