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氧化应激诱导神经干细胞自噬发生的实验研究

作　者: 程卓
导　师: 刘佳梅
学　校: 吉林大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 神经干细胞 氧化应激 自噬
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


神经干细胞（neural stem cells，NSCs）是当今生命科学研究的热点之一。NSCs治疗应用主要体现在：细胞移植治疗、细胞替代和基因治疗及其自我修复治疗。随着NSCs研究的深入，发现NSCs移植后在炎症反应、氧化应激较重的微环境下NSCs的存活率均较低。实验目的：观察NSCs在氧化应激状态下是否有自噬的发生，为研究神经干细胞在氧化应激状态下的生存机制提供新的依据。实验方法：分离、培养Wistar孕鼠的神经干细胞，对生长良好的神经干细胞球进行Nestin免疫细胞化学染色。应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。应用MTT法检测不同浓度H2O2对NSCs生存率的影响，计算神经干细胞的生存率。通过吖啶橙（AO）染色观察细胞内酸性自吞噬空泡的积聚。应用透射电子显微镜对比观察各组NSCs超微结构的变化。通过Western blot技术检测各组LC3蛋白的表达情况。实验结果：我们成功的分离、培养了NSCs；MTT比色法结果显示，不同剂量H2O2作用于NSCs12h或24h后，随着H2O2浓度的增加，细胞生存率逐渐降低，并呈剂量时间相关性，而0.5mM、1mM H2O2组与对照组相比具有统计学意义。与对照组相比，0.5mM H2O2组AO染色结果可见红色荧光阳性结果显著增强，细胞酸性自吞噬空泡产生明显增多。0.5mM H2O2作用于NSCs12h后，应用透射电子显微镜检测自吞噬空泡的形成。结果显示，对照组NSCs表现为正常细胞形态，细胞核呈规则圆形。0.5mM H2O2作用后细胞体积变大，细胞膨胀，有明显的自吞噬空泡生成。0.5mM H2O2作用于NSCs12h后，通过Western Blot检测LC3蛋白表达。结果表明，与对照组相比，0.5mM H2O2作用后LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强。结论：氧化应激可以通过一些通路来诱导神经干细胞自噬的发生，这为探讨神经干细胞生存与死亡机制的研究提供了新的理论依据。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-8
英文缩略词表  8-9
前言  9-10
第1章 文献回顾  10-16
  1.1 神经干细胞的研究进展  10-12
    1.1.1 神经干细胞的定义  10
    1.1.2 神经干细胞的分布与分裂特征  10
    1.1.3 神经干细胞增殖与分化的调控  10
    1.1.4 神经干细胞在治疗中的应用  10-11
    1.1.5 神经干细胞的研究展望  11-12
  1.2 氧化应激与神经细胞的联系  12-13
    1.2.1 氧化应激的概念  12
    1.2.2 氧化应激的相关调控机制  12-13
    1.2.3 氧化应激与神经退行性疾病的联系  13
  1.3 自噬  13-16
    1.3.1 自噬体的形态和发生过程  14
    1.3.2 自噬的生化检测  14
    1.3.3 自噬与细胞凋亡的关系  14
    1.3.4 自噬的生理功能  14-15
    1.3.5 自噬与神经退行性疾病  15
    1.3.6 自噬与肿瘤  15-16
第2章 氧化应激诱导神经干细胞自噬发生的实验研究  16-28
  2.1 材料与方法  16-20
    2.1.1 主要仪器设备  16
    2.1.2 主要试剂  16-17
    2.1.3 实验动物  17
    2.1.4 实验方法  17-20
  2.2 结果  20-25
    2.2.1 神经干细胞的分离、培养  20-21
    2.2.2 神经干细胞的鉴定  21-22
    2.2.3 神经干细胞分化的鉴定  22-23
    2.2.4 MTT 法检测 H_2O_2对神经干细胞的存活率的影响  23
    2.2.5 Acridine orange 染色检测酸性自吞噬空泡积聚  23-24
    2.2.6 透射电子显微镜观察细胞自吞噬空泡的形成  24
    2.2.7 Western Blot 检测 LC3 蛋白表达  24-25
  2.3 讨论  25-27
  2.4 结论  27-28
参考文献  28-32
致谢  32

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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