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雷公藤红素对肿瘤细胞中缺氧诱导因子-1α及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

作　者: 梁贺
导　师: 张善玉; 金学军
学　校: 延边大学
专　业: 药物分析学
关键词: 雷公藤红素 蛋白免疫印迹 裸鼠 氯化钴 缺氧诱导因子(HIF-1α)
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：缺氧诱导因子HIF-1α是恶性肿瘤发生的一个重要因子,本文探讨雷公藤红素对人肝癌细胞Hep3B中HIF-1α活化的影响,为雷公藤红素抗肿瘤药物的开发提供理论依据。方法：肝癌细胞Hep3B.宫颈癌细胞Hela,胃癌细胞SK-Hep1给予不同浓度的雷公藤红素(Celastrol)并缺氧诱导箱中孵育,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测雷公藤红素(Celastrol)对HIF-1α转录活性的影响；氯化钴(CoCl2)模拟Hep3B缺氧模式,Western Blot法证明雷公藤红素对Hep3B中HIF-1α的活化的影响；蛋白质合成抑制剂(Cycloheximide)和蛋白质降解抑制剂(MG-132)等方法来检测雷公藤红素对Hep3B中HIF-1α合成和降解的影响；通过反转录链式聚(RT-PCR)反应检测雷公藤红素对HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF), EPO mRNA的表达水平的影响；双荧光素酶报告基因法(Luciferase)检测雷公藤红素对Hep3B-HRE中HIF-la转录活性的影响；噻唑蓝比色分析法(MTT)检测雷公藤红素对Hep3B增殖的影响；细胞体外侵袭实验(in vitro invasion)检测雷公藤红素对Hep3B侵袭和转移的影响；将宫颈癌细胞移植裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤模型,灌胃给予不同剂量的雷公藤红素,观察雷公藤红素对裸鼠接种肿瘤生长与转移的影响及在中对裸鼠组织中HIF-1α的影响并绘制肿瘤生长曲线；采用蛋白免疫印迹法验证雷公藤红素对裸鼠体内组织中HIF-la活性的影响；结果：雷公藤红素呈剂量依赖性抑制了缺氧模式下的Hep3B、Hela、SK-Hep1中HIF-1α的表达水平；雷公藤红素呈剂量依赖性抑制了COC12模拟Hep3B缺氧中HIF-la的表达水平；雷公藤红素对HepSB中HIF-1α的合成有抑制作用,并具有时间依赖性抑制,但对其降解不影响；雷公藤红素呈剂量依赖性抑制了Hep3B中VEGF、EPO mRNA的表达水平;MTT法和Luciferase说明雷公藤红素对Hep3B的增殖基本没有影响并具有药物活性；通体体外侵袭实验说明雷公藤红素呈剂量依赖性抑制了Hep3B的侵袭和转移的能力；雷公藤红素对裸鼠皮下移植瘤的生长呈明显的抑制作用,并呈现剂量依赖性的抑制,同时对裸鼠的心,对肝脏,脾,肺肾,实体肿瘤组织中HIF-1α蛋白质均呈现出剂量依赖性的抑制。结论：雷公藤红素具有抗肿瘤作用,对HIF-1α的合成有作用但对HIF-1α的降解不起作用,从而从新的视觉阐明肿瘤发生发展机制,为肿瘤的早期诊治和有效预防提供更多新的理论依据。

全文目录


摘要  6-8
Abstract  8-12
第一章 前言  12-14
第二章  14-39
  2.1 仪器与试剂  14-17
    2.1.1 主要仪器设备  14
    2.1.2 主要实验试剂  14-17
  2.2 实验方法  17-28
    2.2.1 细胞培养  17
    2.2.2 蛋白免疫印迹法  17-22
    2.2.3 氯化钴(COCl_2)模拟肝癌细胞(Hep3B)缺氧法  22-23
    2.2.4 蛋白酶体抑制剂MG132  23-26
    2.2.5 蛋白酶体抑制剂CHX  26-28
  2.3 链式聚合酶反应RT-PCR法  28-30
  2.4 荧光素酶报告基因法(Luciferase)  30-32
  2.5 噻唑蓝比色分析法(MTT)法  32-33
  2.6 酶联免疫吸附测定法(ELISA)  33-35
  2.7 细胞体外侵袭实验(in vitro invasion)  35-37
  2.8 结论  37-39
第三章 体内实验  39-45
  3.1 仪器与试剂  39-40
  3.2 实验方法  40
  3.3 肿瘤体积的测量  40-41
  3.4 蛋白免疫印迹法(Western blot)  41-43
    3.4.1 解刨裸鼠取其体内组织  41
    3.4.2 裸鼠组织捣碎  41-42
    3.4.3 组织中核蛋白的提取  42-43
  3.5 结论  43-45
致谢  45-46
参考文献  46-48
综述  48-57
  参考文献  54-57

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