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三七紫外指纹图谱研究

作　者: 丁永丽
导　师: 张庆芝; 张金渝
学　校: 云南中医学院
专　业: 中药学
关键词: 三七紫外指纹图谱显色剂主成分分析聚类分析
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

三七[Panax notoginseng (Burk) F. H Chen]为五加科人参属的重要药用植物，主要以干燥根入药，具有散淤止血，消肿定痛的功效。其主要成分有三七总皂苷，目前，已从三七不同部位中分离出60多种单体皂苷类成分，其中大部分为达玛烷型四环三萜皂苷。三七总皂苷具有止血活血、补血、镇痛镇静、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等多种药理活性，主要用于治疗心脑血管系统、血液系统、免疫系统疾病等。紫外指纹图谱法分别采用多种不同极性溶剂对药材中不同极性区间的成分进行提取，从整体上更为细致的反映药材的成分信息，可以用于中药材的品种鉴别及同种药材的质量评价。皂苷类成分的紫外吸收较弱，使得紫外光谱技术在三七质量评价中的应用具有一定的局限性；另一方面，皂苷类成分与某些特定的显色剂会有显色反应，从而增强皂苷类成分的紫外吸收，这一方法已广泛应用在皂苷类成分的定量分析中。显色剂显色结合紫外光谱法分析三七紫外指纹图谱，在全面反映三七化学成分信息的同时，强调了三七中皂苷类成分的紫外特征，符合中药指纹图谱完整性和特征性的要求。本研究采用氯仿、乙醇和水对三七中不同极性区间的成分进行分步提取，利用紫外光谱仪构建三七紫外指纹图谱，对三七的指纹图谱进行系统研究。主要研究结果如下：1）三七不同溶剂提取液的紫外吸收主要在190-250nm的波长范围。双指标序列分析法、聚类分析法和主成分分析法的结果与图谱直观分析结果一致，三七紫外指纹图谱的相似性较小，变异性较大；三七样品因生长年限和产地的不同，其紫外指纹图谱有较大的差异性。2）采用氯仿、乙醇和水对三七样品进行提取，分别在三种提取液中加入一定量5%硫酸香草醛、10%硫酸、1%氯化铝、5%磷酸香草醛、5%冰乙酸香草醛、5%冰乙酸香草醛+高氯酸（1:4），构建不同溶剂及显色剂条件下三七紫外指纹图谱。结果显示，不同显色剂条件下，三七紫外指纹图谱重现性、精密度和稳定性良好，RSD值均小于1%；指纹图谱直观对比、方差分析和聚类分析结果表明，加入10%硫酸和1%氯化铝对三七紫外指纹图谱没有显著影响；加入5%硫酸香草醛、5%磷酸香草醛、5%冰乙酸香草醛和5%冰乙酸香草醛+高氯酸（1:4）4种显色剂对三七的紫外指纹图谱具有显著影响，吸收峰数目明显增多，吸收波长范围变宽。3）采用双指标序列、系统聚类、主成分分析、PLS-MD分析等四种方法对5%硫酸香草醛、5%磷酸香草醛和5%冰乙酸香草醛三种显色剂显色，结果显示三七样品的共有峰率数据分布较为集中，主要分布在50%-70%范围之间。PLS-MD分析表明，不同产地和生长年限的三七样品紫外指纹图谱有差异，依据产地和生长年限可对三七样品进行分类。不同显色剂显色后其分类结果有差异，硫酸香草醛显色后，三七样品按产地分为云南文山、云南其他产区和广西靖西三类；磷酸香草醛显色后，云南红河所产三七与其他产地三七存在较大差异；冰乙酸香草醛显色后，不同产地之间有交叉，样品的分类特征不明显。通过主成分分析可以明确区分不同产地和不同生长年限的三七样品。4）采用冰乙酸香草醛-紫外指纹图谱法对三七不同药用部位（须根、主根、根茎、茎、叶和种子）的紫外指纹图谱进行研究，共有峰率和变异峰率双指标序列分析法、主成分分析法和聚类分析法三种分析表明，根茎与须根，茎与叶均有较大的化学相似性，种子和主根与其他部位均有较大差异。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-11
引言  11-13
第一章三七紫外指纹图谱初步研究  13-19
  1.1 实验部分  13-14
    1.1.1 实验材料及试剂  13-14
    1.1.2 实验仪器  14
    1.1.3 实验方法  14
  1.2 结果与分析  14-17
    1.2.1 最佳提取时间  14
    1.2.2 实验方法考查  14-15
    1.2.3 紫外指纹图谱  15-16
    1.2.4 共有峰和变异峰的确定和识别  16
    1.2.5 紫外指纹图谱双指标序列分析  16
    1.2.6 聚类分析  16-17
    1.2.7 主成分分析  17
  1.3 小结  17-19
第二章不同显色剂对三七紫外指纹图谱的影响  19-27
  2.1 实验部分  19-20
    2.1.1 实验材料及试剂  19
    2.1.2 实验仪器  19
    2.1.3 实验方法  19-20
  2.2 结果与分析  20-25
    2.2.1 重现性实验  20
    2.2.2 稳定性实验  20
    2.2.3 精密度实验  20-22
    2.2.4 紫外指纹图谱直观对比分析  22-24
    2.2.5 方差分析  24
    2.2.6 聚类分析  24-25
  2.3 小结  25-27
第三章不同显色剂在三七紫外指纹图谱中的应用研究  27-37
  3.1 实验部分  27-28
    3.1.1 实验材料及试剂  27
    3.1.2 实验仪器  27-28
    3.1.3 实验方法  28
  3.2 结果与讨论  28-35
    3.2.1 不同显色剂显色三七紫外指纹图谱  28-31
    3.2.4 共有峰和变异峰的确定和识别  31
    3.2.5 紫外指纹图谱双指标序列分析  31
    3.2.6 三七不同显色剂紫外指纹图谱聚类分析  31-32
    3.2.7 三七不同显色剂 PLS-MD 分析  32-33
    3.2.8 三七不同显色剂紫外指纹图谱主成分分析  33-35
  3.4 小结  35-37
第四章冰乙酸香草醛显色剂在三七不同药用部位紫外指纹图谱中的应用  37-45
  4.1 实验部分  37-38
    4.1.1 实验材料及试剂  37-38
    4.1.2 实验仪器  38
    4.1.3 测试溶液的制备  38
    4.1.4 光谱处理  38
  4.2 结果与讨论  38-44
    4.2.1 三七不同药用部位紫外指纹图谱  38-42
    4.2.2 共有峰和变异峰的识别和确定  42
    4.2.3 共有峰率和变异峰率双指标序列分析法  42-43
    4.2.4 聚类分析法  43
    4.2.5 主成分分析法  43-44
  4.3 小结  44-45
结论  45-47
参考文献  47-51
文献综述中药指纹图谱研究进展  51-65
  1 中药指纹图谱研究概述  51
  2 中药指纹图谱研究的分析方法  51-56
    2.1 色谱指纹图谱法  52-54
    2.2 光谱指纹图谱法  54-56
    2.3 生物指纹图谱法  56
  3 中药指纹图谱的评价方法  56-58
    3.1 直观对比法  56
    3.2 相似性分析法  56-57
    3.3 模式识别法  57-58
  4 指纹图谱在中药质量评价中的应用  58-59
    4.1 道地性判别  58
    4.2 真伪鉴别  58
    4.3 中药的谱效关系研究  58-59
  5 结论  59
  参考文献  59-65
附录  65-89
  附表 1 三七紫外指纹图谱共有峰率变异峰率双指标序列计算结果  65-71
  附表 2 硫酸香草醛-三七紫外指纹图谱共有峰率变异峰率双指标序列分析结果  71-77
  附表 3 磷酸香草醛-三七紫外指纹图谱共有峰率变异峰率双指标序列分析结果  77-83
  附表 4 冰乙酸香草醛-三七紫外指纹图谱共有峰率变异峰率双指标序列分析结果  83-89
攻读硕士学位期间发表的论文  89-90
致谢  90

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