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复方苦参注射液化学成分和质量控制研究

作　者: 马悦
导　师: 张启伟
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中药学
关键词: 复方苦参注射液化学成分指纹图谱 LC-MS 含量测定
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

复方苦参注射液(Compound Kushen Injection, CKI)又名岩舒注射液,收载于卫生部药品标准第14册,由苦参和白土苓两味药提取精制而成,具有抗肿瘤、镇痛、增强免疫等功效,主要用于减轻癌痛。苦参来源于豆科槐属植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根,白土苓为百合科肖菝葜属植物肖菝葜Heterosmilacis. japonica Kunth.、短柱肖菝葜H. yunnanensis Gapnep或华肖菝葜H. chinensis Wang的干燥块茎。CKI以两味药粉末(苦参1400g、白土苓600g)为原料,经1%醋酸水浸渍渗漉提取,药渣水提,合并浓缩,反复醇沉、活性碳脱色及NaOH调pH,加注射用水而得。本文以CKI为研究对象,通过化学分离、化合物结构鉴定及LC-MS成分指认等方法明确其物质基础,初步建立了CKI指纹图谱标准,并对现有CKI质量控制方法进行优化,为中药大品种技术改造,生产更加安全、有效、质量稳定可控的中药注射液奠定基础。研究采用HPD100大孔树脂对注射液进行粗分,经过反复硅胶柱层析、Sephadex LH-20、ODS和半制备液相色谱纯化,从中分离得到了11个化合物；通过各种波谱数据和理化性质,鉴定了化合物的结构,均为首次从该注射液中分离得到,分别是番石榴酸、大泽米苷、腺嘌呤、氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐果碱、N-甲基金雀花碱、鹰靛叶碱、鹅掌楸苷和三叶豆紫檀苷。通过对LC-MS数据分析,指认了注射液中其它12个微量成分,包括5α,9α-羟基苦参碱、氧化槐花醇、氧化槐定碱、9α-羟基槐果碱、槐定碱、槐花醇、异槐果碱、7,11-去氢苦参碱、5,6-dehydrolupanine、9α-羟基苦参碱、lamprolobine和异苦参碱。为了全面地反映CKI所含化学成分的种类和数量,提高产品批与批间的稳定性,本研究初步建立了CK!指纹图谱标准。采用Luna C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相A：0.01mol·L-1醋酸铵水溶液(氨水调pH值8.0),流动相B：乙腈-0.01mol·L-1的醋酸铵水溶液=9：1,线性梯度洗脱：0min→60min,A：B=100：0→A：B=60：40；流速为0.8mL·min-1；柱温为35℃；检测波长：225nm。在上述色谱条件下共测试了27批CKI样品,使用《中药指纹图谱相似度评价软件》以生成的对照指纹图谱为参照进行相似度分析,其中24批相似度均在0.85以上；选择各批注射液色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰,8个共有峰占总峰面积的百分比依次为28.2%、3.3%、20.6%、7.9%、2.8%、10.3%、4.9%和1.9%,它们的百分比之和为80.0%。暂定复方苦参注射液指纹图谱标准为：供试品的图谱应与对照指纹谱图一致；用氧化苦参碱及对照指纹谱图中标示的色谱峰校正后,相似度应不低于0.85。针对CKI现行质量标准(WS3-B-2752-97)采用酸碱滴定法测定总生物碱的含量,对其中非生物碱成分没有质量控制指标,不能有效地控制CKI的产品质量等问题,开展了CKI质量标准的提升工作。选取CKI中含量较高,且有抗肿瘤活性的氧化苦参碱、氧化槐果碱、N-甲基金雀花碱、苦参碱、槐果碱和黄酮类主要成分三叶豆紫檀苷作为质控指标,建立了CKI中6个主要成分的HPLC同步测定方法。采用Luna C18柱(4.6mm×250mm,5μmn)；柱温35。C；流动相A：0.01mol·L-1醋酸铵水溶液(氨水调节pH=8.0),流动相B：乙腈：0.01mol·L-1醋酸铵水溶液=3：2；线性梯度洗脱：0min,A：B=80：20,8min,A：B=50：50,10min,A：B=47：53,25min,A：B=40：60；流速：0.8mL·min-1；检测波长225nm。方法学考察结果表明方法稳定、可靠。采用建立的方法测定了2008年至2010年随机抽取的19批CKI样品,结果表明,各样品均含有氧化苦参碱、氧化槐果碱、N-甲基金雀花碱、苦参碱、槐果碱和三叶豆紫檀苷,但是不同批次样品之间各指标成分含量存在差异。此方法适合用于CKI生产过程以及成品中多成分的质量控制,且增加了对注射液中黄酮类成分的含量测定,使CKI质量控制方法更为全面。

全文目录

目录  4-8
摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
前言  13-15
第一章文献研究  15-53
  1 复方苦参注射液原料药的研究进展  15-34
    1.1 苦参的研究概况  15-30
      1.1.1 化学成分  15-28
      1.1.2 药理作用  28-30
      1.1.3 药代动力学研究  30
    1.2 白土苓的研究概况  30-34
      1.2.1 化学成分  31-33
      1.2.2 药理作用  33-34
  2 复方苦参注射液的研究概况  34-42
    2.1 化学成分  35
    2.2 质量标准  35-36
    2.3 代谢研究  36-37
    2.4 药理作用  37-38
      2.4.1 抗癌作用  37
      2.4.2 镇痛作用  37-38
      2.4.3 抗炎、提高免疫作用  38
      2.4.4 止血  38
    2.5 临床研究  38-42
      2.5.1 恶性肿瘤  38-41
      2.5.2 乙型肝炎纤维化  41
      2.5.3 癌性疼痛  41-42
  参考文献  42-53
第二章复方苦参注射液化学成分研究  53-65
  1 结构鉴定  55-59
  2 实验部分  59-63
    2.1 仪器与材料  59
    2.2 提取分离  59-63
      2.2.1 注射液化学成分的富集与粗分  59-60
      2.2.2 制备纯化  60-63
  3 波谱数据  63-65
第三章注射液HPLC指纹图谱标准的建立及色谱峰指认  65-79
  1 仪器与试药  65
  2 注射液HPLC指纹图谱标准的建立  65-70
    2.1 色谱条件  65-66
    2.2 注射液HPLC指纹图谱标准的建立  66-70
      2.2.1 27批注射液指纹图谱检测  66
      2.2.2 对照指纹图谱的生成  66-67
      2.2.3 共有峰的确定  67
      2.2.4 共有峰的相对保留值及相对峰面积比值  67-70
      2.2.5 27批复方苦参注射剂指纹图谱相似度计算  70
  3 指纹图谱中色谱峰指认  70-78
    3.1 对照品溶液的制备  71
    3.2 供试品溶液的制备  71
    3.3 HPLC指纹图谱中11个主要色谱峰指认  71
    3.4 HPLC-MS模式下指纹图谱成分推测  71-73
    3.5 注射液中化学成分来源分析  73-74
      3.5.1 色谱条件  73
      3.5.2 原料药供试品制备  73
      3.5.3 注射液供试品制备  73
      3.5.4 原料药与注射液HPLC比较  73-74
    3.6 白土苓入药成分分析  74-76
      3.6.1 白土苓化学成分分析  74-75
      3.6.2 白土苓入药成分追踪  75-76
    3.7 注射液中黄酮类成分分析  76
    3.8 讨论  76-78
      3.8.1 两原料药对复方化学成分贡献的比较  76-77
      3.8.2 白土苓入药成分分析  77
      3.8.3 注射液中黄酮类成分分析  77-78
  4 小结  78-79
第四章复方苦参注射液主要成分的含量测定  79-87
  1 仪器与试药  79
  2 方法与结果  79-86
    2.1 色谱条件  79-80
    2.2 对照品溶液的制备  80-81
    2.3 供试品溶液的制备  81
    2.4 线性关系考察  81-82
    2.5 精密度试验  82
    2.6 稳定性试验  82-83
    2.7 重复性试验  83
    2.8 加样回收试验  83-85
    2.9 样品含量测定  85-86
  3 讨论  86-87
    3.1 流动相的选择  86
    3.2 色谱柱  86
    3.3 萃取条件  86
    3.4 测定结果分析  86-87
第五章结论  87-88
参考文献  88-91
致谢  91-93
个人简介  93-95
附图  95-111

复方苦参注射液化学成分和质量控制研究

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