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蓝莓总黄酮的提取纯化及紫心甘薯总黄酮的抗衰老作用评价

作　者: 邵盈盈
导　师: 李向荣
学　校: 浙江大学
专　业: 药学
关键词: 蓝莓总黄酮提取纯化抗氧化性紫心甘薯 D-半乳糖学习记忆
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本论文采用正交设计优选了蓝莓总黄酮的提取和纯化工艺,并测定了纯化后蓝莓总黄酮的体外抗氧化活性；探讨了紫心甘薯总黄酮(PSPF)对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力的影响及对小鼠脑组织氧化损伤的保护作用。蓝莓,又称越橘,属杜鹃花科,越橘属植物,为多年生落叶或常绿灌木。果实富含花青素,绿原酸,黄酮等多种生物活性成分,而其中的黄酮类化合物在抗氧化、保护人体免受自由基的损伤,增强血管弹性,延缓衰老,保护视力等方面起到一定的作用。为进一步开发和利用蓝莓资源,本论文以芦丁为标准品,选取乙醇浓度,料液比,提取时间,提取次数为考察因素,以总黄酮提取率为指标,采用正交实验优选了超声辅助提取蓝莓总黄酮的最佳提取工艺。并以静态饱和吸附量和解析率为指标,从4种大孔树脂(AB-8、NKA-9、NKA-Ⅱ、D101)中筛选出最适合纯化蓝莓总黄酮的树脂型号,通过选用L9(34)正交表设计实验,考察了上样浓度、洗脱液pH、洗脱乙醇浓度和洗脱流速四个纯化工艺参数,以回收率为指标,确立纯化蓝莓总黄酮的最佳条件。然后将纯化所得的蓝莓总黄酮进行抗氧化活性研究,以VC和芦丁为对照,考察了蓝莓总黄酮对DPPH自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除能力。主要实验结果有：一、蓝莓总黄酮最优提取条件为：50%乙醇20倍量,于40℃,超声功率560W下重复提取三次,每次45min,提取率为4.01%。二NKA-Ⅱ纯化蓝莓总黄酮效果最好,最佳纯化工艺为：上样浓度1.355mg·mL-1,洗脱pH为3,洗脱乙醇浓度70%,洗脱流速2mL·min-1。在此条件下纯化的总黄酮纯度可达41.41%,比未纯化前提高33.94倍。三、蓝莓总黄酮对DPPH·和·OH的清除能力以清除率达到50%时所对应的样液质量浓度(IC5o)为指标表示分别为0.0217mg·mL-1和0.1037mg·mL-1,蓝莓总黄酮对DPPH·的清除能力和芦丁相当,但弱于VC,清除·OH的能力最强,高于芦丁和VC,表明蓝莓总黄酮具有较好的抗氧化活性。紫心甘薯是我国科技工作者从日本引进的新品种,营养成分丰富,富含黄酮类化合物,有很好的保健作用,本文初步研究了紫心甘薯总黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力的影响及对小鼠脑组织氧化损伤的保护作用。将ICR小鼠随机分为6组(n=10)：正常组(NC)、模型组、维生素C组(100mg-kg-1·d-1)、 PSPF低、中、高(50、100、200mg-kg-1·d-1剂量组。除正常组外,小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖1g·kg-1·d-1连续42d,建立亚急性衰老模型,从造模第二周开始分别灌胃给予各组相应药物。42d后采用Morris水迷宫法测定衰老小鼠学习记忆能力,同时测定小鼠脑组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果表明：与模型组相比,PSPF中、高剂量组能明显改善小鼠的衰老体征,缩短逃避潜伏期和空间搜索实验中第一次到达平台所在区域的时间(P<0.05),增加穿越平台所在区域的次数(P<0.05),并能有效提高衰老小鼠脑组织SOD和GSH-PX活性,降低MDA含量(P<0.05,P<0.01),呈现量效依赖关系。PSPF能改善D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力,具有延缓衰老的作用,其作用机制可能与机体抗氧化酶活性增加,清除自由基、抗氧化能力提高所致。

全文目录

致谢  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
目录  11-13
第一章蓝莓总黄酮的提取工艺研究  13-18
  1.1 仪器与试剂  14
  1.2 实验方法  14-15
  1.3 实验结果  15-17
  1.4 讨论  17-18
第二章蓝莓总黄酮的纯化工艺优化  18-25
  2.1 仪器与试剂  18-19
  2.2 实验方法  19-21
  2.3 实验结果  21-23
  2.4 讨论  23-25
第三章蓝莓总黄酮的抗氧化活性测定  25-30
  3.1 实验仪器与试剂  25-26
  3.2 实验方法  26-27
  3.3 实验结果  27-29
  3.4 讨论  29-30
第四章紫心甘薯总黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆的影响  30-37
  4.1 仪器与试剂  30-31
  4.2 实验动物  31
  4.3 实验方法  31-32
  4.4 实验结果  32-35
  4.5 讨论  35-37
参考文献  37-40
综述黄酮类化合物的提取纯化和抗氧化性研究进展  40-69
  1 蓝莓简介  40-42
  2 紫心甘薯简介  42-44
  3 黄酮类化合物研究概况  44-60
    3.1 黄酮类化合物简介  44-46
    3.2 黄酮类化合物的理化性质  46-47
    3.3 黄酮类化合物的提取方法  47-51
    3.4 黄酮类化合物的纯化方法  51-55
    3.5 黄酮类化合物的体外抗氧化活性评价方法  55-58
    3.6 黄酮类化合物的药理活性  58-60
  4 本文研究意义和主要内容  60-61
  参考文献  61-69
作者简介  69

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