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兔多杀性巴氏杆菌purF缺失突变株的构建及生物学特性的研究

作　者: 张爱芹
导　师: 曲连东; 崔玉东
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 多杀性巴氏杆菌 purF ΔpurF突变株致病性
分类号: S858.291
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 34次
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内容摘要

兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性、败血性传染病，又称兔出血性败血症。兔巴氏杆菌病在世界大多数国家和地区都有分布，给家兔养殖业带来了重大的经济损失，被列为重点防治的家兔传染病之一。PurF是与巴氏杆菌营养代谢有关的基因，编码嘌呤合成过程中谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶，是嘌呤合成过程中的关键酶。以purF为目标基因，利用正向同源重组技术构建ΔpurF突变株，并进行生化特性、生长特性、遗传稳定性、粘附和侵袭能力及对动物的致病性等生物学特性方面的研究，验证purF的致病性，明确该基因是否是多杀性巴氏杆菌的毒力基因，为阐明PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌中的致病机制奠定基础。PCR扩增C51-17株purF的上、下游同源臂，将其克隆至质粒pBC-SK相应的酶切位点，构建重组质粒pBC-purF；将卡那霉素抗性基因盒克隆至purF的上、下游同源臂之间，构建重组转移质粒pBC-ΔpurF；电转化至C51-17感受态细胞中，在抗性培养基上进行筛选，然后用PCR、Western blot和测序进一步验证，并进行生物学特性研究。通过生化试验、遗传稳定性试验、生长特性试验、粘附和侵袭试验和致病性试验等研究突变株的生物学特性。结果表明：成功构建了多杀性巴氏杆菌ΔpurF突变株，连续传代20代，具有良好的遗传稳定性；生化特性不变；ΔpurF突变株与亲本菌株相比，对Vero细胞的粘附能力增强，但侵袭能力基本一致；体外生长曲线表明，ΔpurF突变株在1-3h生长速度基本和亲本菌C51-17株一致，3h后生长速度稍快于亲本菌。ΔpurF突变株对Balb/c小鼠的致病实验结果表明：腹腔注射Balb/c小鼠，ΔpurF突变株在剂量为1.0×106CFU时对小鼠无致死性，而亲本菌C51-17在剂量为1.0×102CFU对小鼠是完全致死性的，表明该突变株对小鼠的致病性是减弱的。本研究利用正向筛选同源重组技术构建了多杀性巴氏杆菌ΔpurF突变株，并分析突变株对小鼠的致病性，该突变株初步明确了purF是多杀性巴氏杆菌的毒力基因，这也为进一步阐明PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌中的致病机制奠定基础。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章文献综述  8-22
  1.1 兔巴氏杆菌病的流行及危害  8-9
  1.2 兔多杀性巴氏杆菌病原学  9-11
  1.3 多杀性巴氏杆菌的主要毒力因子的致病性和免疫原性研究进展  11-16
  1.4 多杀性巴氏杆菌的致病机理  16-17
  1.5 兔巴氏杆菌病临床症状  17
  1.6 兔巴氏杆菌病的病理学特征  17
  1.7 兔巴氏杆菌病诊断方法研究进展  17-18
  1.8 兔巴氏杆菌病的防治  18-19
  1.9 兔巴氏杆菌病疫苗研究进展  19-21
  1.10 研究的目的和意义  21-22
第二章兔多杀性巴氏杆菌 purF 缺失突变株的构建及生物学特性的研究  22-42
  2.1 材料  22-23
  2.2 方法  23-32
  2.3 结果  32-40
  2.4 讨论  40-42
第三章结论  42-43
参考文献  43-51
致谢  51-52
作者简历  52-53
附录  53-54

兔多杀性巴氏杆菌purF缺失突变株的构建及生物学特性的研究

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