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嵌合型PCV1-2灭活疫苗生产用PK-15细胞库和PCV1-2种毒库的建立及鉴定

作　者: 周利锋
导　师: 高崧; 刘秀梵
学　校: 扬州大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪圆环病毒2型嵌合型PCV1-2灭活疫苗 PK-15细胞库种毒库建立鉴定
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

猪圆环病毒2型(porcine circovirus2, PCV2)与猪群中发生的多种传染病相关,它己被证明是引起断奶仔猪多系统衰弱综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)等疾病的重要病原体。自1991年在加拿大断奶仔猪群中首次发现PMWS以来,世界上许多养猪国家和地区均已报道了该病的发生和流行。该病的主要临床症状是消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、皮肤苍白及黄疸。目前国内外学者都在致力于有效控制和消灭PCV2流行的有效疫苗的研制并己取得了一定进展,有些疫苗已经进入临床试验和综合评价中。本实验室研制的嵌合型猪圆环病毒PCV1-2灭活疫苗可以有效地诱导免疫猪产生对PCV2感染的保护性免疫应答。本研究的目的在于建立PCV1-2灭活疫苗生产用三级细胞库,以保证PK-15细胞作为病毒培养基质的安全性。同时,建立PCV1-2三级种毒库,为疫苗的生产提供种子。1嵌合型PCV1-2灭活苗生产用PK-15细胞库的建立及鉴定建立PCV1-2灭活疫苗生产用三级细胞库,保证PK-15细胞作为病毒培养基质的安全性。根据2000年版《中华人民共和国兽用生物制品规程》对生物制品生产用传代细胞系的要求,对PK-15细胞进行核型分析、致肿瘤性等一系列基础性试验。结果表明：所建立和保存的PK-15细胞染色体为2n=38,经过对比分析,在基础细胞库中存在的染色体标志,在最高代次细胞中也存在,与基础细胞库细胞相比,所有细胞的染色体模式数均低于10%,并且核型相同；将三个细胞库的种子分别传至最高限制代次45代,皮下接种裸鼠12周无肿瘤形成；没有污染细菌、真菌、支原体和外源病毒,符合2000年版《中华人民共和国兽用生物制品规程》疫苗生产用细胞库要求,可以作为嵌合型PCV1-2灭活疫苗生产的细胞。2PCV1-2种毒库的建立及鉴定为了保证生产疫苗的质量和稳定性,建立了疫苗生产用PCVl-2的三个种毒库,即原始种毒库、基础种毒库和工作种毒库。按照2005年第三版《中华人民共和国兽药典》对生产所用毒种的要求,用间接免疫荧光试验(IFA)对各批次毒种病毒滴度进行测定,并进行细菌、真菌、支原体和外源病毒的检测,确保种毒纯净。嵌合病毒PCV1-2各批次种毒滴度均在104.0TCID50/mL以上；无细菌、支原体及外源病毒污染,符合2005年第三版《中华人民共和国兽药典》要求,可以作为PCV1-2灭活疫苗生产的种毒。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-8
符号说明  8-9
前言  9-17
  1 PCV病原学  9-10
  2 PCV的分子生物学特性  10-12
  3 PCV2的流行病学特征  12-14
  4 致病机理  14-15
  5 PCV2的防制  15-16
  6 本研究的前期基础工作  16-17
第一章嵌合型PCV1-2灭活苗生产用PK-15细胞种库的建立及鉴定  17-34
  摘要  17
  1 材料与方法  17-23
    1.1 材料  17-19
    1.2 方法  19-23
  2 结果  23-32
  3 讨论  32-34
第二章 PCV1-2种毒库的建立及鉴定  34-45
  摘要  34
  1 材料与方法  34-38
    1.1 材料  34-35
    1.2 方法  35-38
  2 结果  38-43
  3 讨论  43-45
全文小结  45-46
参考文献  46-52
致谢  52-53

嵌合型PCV1-2灭活疫苗生产用PK-15细胞库和PCV1-2种毒库的建立及鉴定

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