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四种植物多糖抑菌抗病毒作用及其对波氏杆菌免疫增强作用的比较研究

作　者: 高秀妹
导　师: 朱瑞良
学　校: 山东农业大学
专　业: 兽医
关键词: 兔支气管败血波氏杆菌植物多糖佐剂抗体淋巴细胞 IL-2
分类号: S853.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

泰山松花粉、槐花、梧桐花及芦荟都集聚了大量的生命元素，饱含丰富的营养成分和活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、提高人体免疫机能等功能，并对肿瘤细胞和艾滋病病毒有抑制作用，对人类健康大有裨益。近年来，中国畜牧业发展取得了举世瞩目的成就，但为追求效益抗生素的使用量与日俱增，随之而来的药物残留等问题严重制约我国畜产品的出口。研发天然植物免疫增强剂成为近几年畜禽业研究的方向之一。鉴于前人相关的研究，本研究针对导致畜禽疫病的几种重要细菌和病毒，研究比较以上4种植物多糖抑菌、抗病毒效果，为开发天然绿色免疫增强剂提供试验依据；研究已经证实多种中药多糖具有增强免疫的功效，本实验室魏凯、孙振红等人已证明以上四种植物多糖具有免疫增强作用。目前的报道多针对某一种中药成分，而同时比较多种中药成分免疫活性及其各自的作用特点还鲜见报道。因此选择蜂胶作为对照，对泰山松花粉多糖、芦荟多糖、槐花多糖、梧桐花多糖各自免疫增强作用的特点进行了比较研究，为筛选开发新型免疫增强剂及畜禽疫苗佐剂提供试验依据。本研究共分为以下两个部分：第一部分4种植物多糖抑菌抗病毒作用的研究为了研究比较4种多糖对多种常见畜禽致病菌和病毒的体外抑菌和抗病毒作用，采用培养基打孔法，观察不同多糖对致病菌的抑菌作用；采用鸡胚接种法，检测不同植物多糖以及不同作用时间对新城疫病毒(NDV)增殖的抑制作用。结果表明：槐花多糖、松花粉多糖、梧桐花多糖、芦荟多糖对供试菌均具有抑菌作用。其中槐花多糖对蜡样芽胞杆菌、八叠球菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌效果较好，抑菌环D>14mm；松花粉多糖对鸡白痢沙门氏菌抑菌效果最好，抑菌环D>16mm，对蜡样芽胞杆菌、奇异变形杆菌、禽波氏杆菌抑菌效果较好，抑菌环D>14mm，梧桐花多糖对四联球菌、八叠球菌、大肠杆菌、禽波氏杆菌的抑菌效果最好，抑菌直径D>16mm，对蜡样芽胞杆菌抑菌效果较好，D>14mm；芦荟多糖对蜡样芽胞杆菌抑菌效果最好，抑菌环D>16mm，对金黄色葡萄球菌、四联球菌、八叠球菌、绿脓杆菌的抑菌效果相对较好，抑菌环D>14mm。不同多糖与NDV作用组的血凝价均低于病毒对照组，并且随浓度的增大和作用时间的延长而降低；至作用2h时，槐花多糖、松花粉多糖和芦荟多糖的5000mg/L浓度组的血凝价降低了4个单位，梧桐花多糖降低了3个单位。第二部分四种植物多糖对波氏杆菌免疫增强作用的比较研究将人工培养并已灭活的支气管败血波氏杆菌分别加入蜂胶佐剂和用水提醇沉法提取的槐花多糖、泰山松花粉多糖、芦荟多糖、梧桐花多糖，制备成相应佐剂的兔支气管败血波氏杆菌灭活苗。取清洁级家兔54只随机分为6组，I、II、III、IV组分别免疫含槐花多糖、泰山松花粉多糖、芦荟多糖、梧桐花多糖的兔支气管败血波氏杆菌灭活苗；V组免疫含蜂胶兔支气管败血波氏杆菌灭活苗；VI组免疫不含佐剂的兔支气管败血波氏杆菌灭活苗。分别在免疫后3、7、14、21、28、35、42d采血，用间接ELISA试验测定血清中抗体效价，用全自动全血分析仪测定淋巴细胞比率和淋巴细胞数，用流式细胞仪测定淋巴细胞转化率，用兔白细胞介素-2（IL-2）酶联免疫检测试剂盒测定血清中白细胞介素-2（IL-2）的含量。结果表明：各多糖组效果总体好于蜂胶组及阴性对照组。总体看来除血清中白细胞介素-2（IL-2）含量这一指标外，泰山松花粉多糖的免疫增强效果最好，梧桐花、槐花多糖次之；芦荟多糖虽总体效果差于另外3种，但其对血清中IL-2含量的影响远远大于另外3种多糖。

全文目录

中文摘要  8-10
Abstract  10-13
1 引言  13-34
  1.1 多糖类免疫调节剂研究进展  13-19
    1.1.1 植物多糖免疫调节剂  13-15
      1.1.1.1 香菇多糖  13
      1.1.1.2 枸杞多糖  13-14
      1.1.1.3 牛膝多糖  14
      1.1.1.4 其他多糖  14-15
    1.1.2 活性多糖免疫调节机理  15-19
      1.1.2.1 整体水平的免疫调节  15
      1.1.2.2 器官水平的免疫调节  15-16
      1.1.2.3 细胞水平的免疫调节  16-17
      1.1.2.4 分子水平的免疫调节  17-18
      1.1.2.5 基因水平的免疫调节  18-19
  1.2 支气管败血波氏杆菌的概述  19-22
    1.2.1 支气管败血波氏菌主要生物学特征  19
    1.2.2 致病性  19-20
    1.2.3 流行病学特点  20
    1.2.4 临床症状  20
    1.2.5 病理剖检变化  20-21
    1.2.6 实验室诊断  21
    1.2.7 控制措施  21-22
  1.3 植物多糖抑菌抗病毒的研究进展  22-26
    1.3.1 多糖抑菌研究现状  22-25
    1.3.2 多糖抗病毒研究现状  25-26
  1.4 新型免疫增强剂的研究现状  26-32
  1.5 选题背景和研究目的  32-34
2 材料和方法  34-39
  2.1 材料  34-35
    2.1.1 菌种  34
    2.1.2 病毒  34
    2.1.3 试验动物及生物制剂  34
    2.1.4 主要化学试剂  34
    2.1.5 主要仪器  34-35
  2.2 方法  35-39
    2.2.1 植物花粉多糖的提取及含量测定  35
    2.2.2 抑菌试验方法  35-36
    2.2.3 抗病毒试验方法  36
    2.2.4 四种植物多糖对波氏杆菌免疫增强作用的比较  36-39
      2.2.4.1 不同植物多糖佐剂灭活苗制备  36-37
      2.2.4.2 动物试验设计  37
      2.2.4.3 抗体水平的检测  37
      2.2.4.4 淋巴细胞比率（数）的测定  37
      2.2.4.5 淋巴细胞转化率的测定  37-38
      2.2.4.6 血清中白细胞介素-2 含量的测定  38
      2.2.4.7 数据处理  38-39
3 结果与分析  39-48
  3.1 抑菌抗病毒试验结果  39-42
    3.1.1 打孔法测定抑菌效果  39-40
    3.1.2 抗鸡新城疫病毒（NDV）试验  40-42
  3.2 四种植物多糖对波氏杆菌免疫增强作用的比较  42-48
    3.2.1 兔血清抗体效价的变化  42-43
    3.2.2 兔血液中淋巴细胞数的变化  43-44
    3.2.3 兔血液中淋巴细胞比率的变化  44-45
    3.2.4 兔血液中淋巴细胞转化率的变化  45-46
    3.2.5 兔血清中 IL-2 的变化  46-48
4 讨论  48-52
结论  52-53
参考文献  53-59
致谢  59-60
个人简介  60-61
攻读硕士学位期间发表的论文  61

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