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IL-18对原代培养的山羊DRG神经元的作用研究

作　者: 范洁
导　师: 徐永平
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 背根神经节 IL-18 MyD88 ATF-3 神经元
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


IL-18属IL-1家族，一种诱导γ干扰素合成的炎性因子，能刺激T细胞增殖，增强自然杀伤细胞活性，参与细胞因子的生成等。研究表明中枢神经系统表达IL-18及其受体IL-18R，中枢神经细胞和外周神经系发生伴有炎症发生的疾病或受到应激时，神经系统都有IL-18及其受体IL-18R表达量成倍增加的现象，并与疾病的严重程度密切相关。本实验室之前从健康成年山羊的腰段背根神经节（dorsal root ganglions, DRGs）中检测到IL-18R的表达，并克隆出其部分基因，但山羊的DRG是否都存在IL-18受体，及DRGs中IL-18R可介导IL-18对DRG的作用仍未知。本试验通过免疫组化法检测了IL-18R在健康成年山羊及2至3月龄胎羊的所有DRGs中是否分布有IL-18R、MyD88和ATF-3。并通过培优化养基以期望获得体外原代培养的DRGs神经元，用免疫荧光法检测体外培养的神经元是否表达IL-18R。向培养体系中添加不同浓度的IL-18，观察IL-18是否影响体外培养的神经元突起生长，及相关蛋白的表达，获得以下实验结果：1.山羊DRGs中存在IL-18R和MyD88，且IL-18R与MyD88在DRGs中的分布特点相似。成年山羊的DRG中，IL-18R和MyD88的免疫阳性产物分布于大型神经元的细胞膜上，以及中、小型神经元的细胞质中；胎羊的DRGs中，IL-18R和MyD88的免疫阳性产物主要分布于神经元的细胞质中和过路神经纤维上2.胎羊DRGs中ATF-3分布于神经元的胞体中，且呈弱阳性。3.采用酶消化法可获得生长均一的神经元，神经元具有长而分支多的突起，突起相互联系而形成神经网络；通过细胞分裂抑制剂阿糖胞苷，差速贴壁法及培养基优化可获得较纯的神经元；培养的前3d为神经元突起再生修复的阶段。4.体外培养的DRGs神经元及非神经元均表达IL-18R。5. IL-18不影响细胞培养上清中LDH的活性变化，且对神经突起的再生无影响。6. IL-18可影响MyD88和ATF-3在神经元的分布位置。50ng/mL的IL-18可抑制MyD88在神经突起的表达，100ng/mL和150ng/mL的IL-18对MyD88在神经元的胞体和突起的表达无影响；50ng/mL、100ng/mL和150ng/mL的IL-18均可抑制ATF-3在神经元的突起上的表达。以上试验结果表明山羊DRGs中表达IL-18R，及IL-18信号转导途径中的衔接蛋白MyD88，IL-18R在山羊DRG神经元中的分布特点与MyD88在山羊DRGs神经元中的分布特点非常相似；体外培养的神经元也具有在体DRG神经元表达IL-18R的特性，这都说明山羊DRGs对IL-18具有反应性。IL-18虽不影响体外培养的神经元的突起的生长，也对神经元无细胞毒作用，但是IL-18影响MyD88的表达部位，及与神经元损伤修复有关的ATF-3的表达部位。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
文献综述  11-17
  第一章 白介素-18 在神经系统中的研究进展  11-17
    1.1 IL-18 信号转导系统  11-12
    1.2 IL-18 的负调控  12
    1.3 IL-18 及其受体在神经系统的分布  12-13
    1.4 IL-18 与下丘脑-垂体-肾上腺轴  13
    1.5 IL-18 与行为  13-14
    1.6 IL-18 与神经性疾病  14-17
      1.6.1 IL-18 与神经性炎症  14-15
      1.6.2 IL-18 与自身免疫性中枢神经退行性疾病  15
      1.6.3 IL-18 与多发性硬化症  15
      1.6.4 IL-18 与阿尔茨海默病  15-16
      1.6.5 IL-18 与帕金森症  16
      1.6.6 IL-18 与外周神经性疾病  16
      1.6.7 IL-18 的其它神经作用  16-17
试验研究  17-39
  第二章 IL-18 对原代培养的山羊 DRG 神经元的作用研究  17-39
    2.1 实验设备与试剂  17-19
      2.1.1 主要仪器  17
      2.1.2 主要试剂  17-19
    2.2 实验方法与步骤  19-24
      2.2.1 载玻片及盖玻片准备  19-20
      2.2.2 切片制备  20
      2.2.3 山羊背根神经节 HE 染色  20
      2.2.4 山羊背根神经节免疫组织化学 SP 法染色  20-21
      2.2.5 胎羊背根感觉神经细胞的分离、培养及筛选纯化  21-22
      2.2.6 神经元的鉴定  22-23
      2.2.7 IL-18 添加  23
      2.2.8 细胞毒性检测  23-24
    2.3 实验结果  24-35
      2.3.1 山羊背根神经节 HE 染色  24-25
      2.3.2 山羊背根神经节 beta-tubulin Ⅲ免疫组化染色结果  25
      2.3.3 成年山羊背根神经节中 IL-18R 和 MyD88 的免疫组织化学 SP 法染色结果  25-27
      2.3.4 胎羊背根神经节中 IL-18R、MyD88 和 ATF-3 的免疫组织化学 SP 法染色结果  27-28
      2.3.5 神经元的鉴定结果  28
      2.3.6 神经元的纯化结果  28-31
      2.3.7 体外培养的 DRG 神经元的生长情况  31-32
      2.3.8 非纯化培养体系中的细胞表达 IL-18R  32
      2.3.9 IL-18 对非纯化培养体系中神经元的影响  32-35
    2.4 讨论  35-39
      2.4.1 山羊背根神经节的结构特点  35-36
      2.4.2 DRG 神经元的体外培养方法  36
      2.4.3 体外培养的 DRG 神经元与非神经元的形态差异  36-37
      2.4.4 IL-18R 及 MyD88 在 DRG 中的表达  37
      2.4.5 ATF-3 在胎羊背根神经节中的表达  37
      2.4.6 IL-18 对体外培养的 DRG 的作用  37-39
结论  39-40
参考文献  40-47
致谢  47-48
作者简介  48

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 山羊
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