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大豆异黄酮对奶牛肠系膜淋巴结与脾脏主要免疫指标的影响研究

作　者: 王明
导　师: 蒋林树
学　校: 北京农学院
专　业: 基础兽医学
关键词: 大豆异黄酮淋巴细胞增殖细胞因子 IL-2 IL-4 ER-β
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

大豆异黄酮是一类与雌二醇(E2)具有相似结构的植物生物活性物质,由于许多免疫细胞上存在雌激素受体,所以大豆异黄酮可能对机体的免疫系统存在着调节作用。本试验旨在研究大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系膜淋巴结中淋巴细胞增殖、活化及细胞因子水平的影响,探讨提高奶牛免疫性能的作用机理,为把大豆异黄酮开发成一种功能性饲料添加剂提供理论依据。一、在研究大豆异黄酮对淋巴细胞的增殖与活化时,试验采用6×2(浓度×时间)实验设计,各浓度梯度大豆异黄酮(0.05、0.25、1.00、5.00、25.00、100.00μg/mL)与淋巴细胞共育培养48h和60h后,用酶标仪在570nm处测得各孔的OD值。结果表明：(1)添加0.05-25.00μg/mL大豆异黄酮能够促进奶牛肠系膜淋巴结中淋巴细胞的增殖,在添加量为5.00μg/mL时达到极显著的促进作用,但大豆异黄酮添加剂量达100.00μg/mL时显著抑制肠系膜淋巴结淋巴细胞的增殖；(2)25.00和100.00μg/mL大豆异黄酮添加组极显著抑制奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.01),而1.00μg/mL浓度组则显著促进奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.05),其余各浓度组对奶牛脾脏淋巴细胞有抑制作用,但差异不显著。二、在研究大豆异黄酮对淋巴细胞细胞因子和雌激素受体表达水平的影响时,采用单因素试验设计,不同浓度的大豆异黄酮[0.00(对照)、0.25、1.00、5.00、25.00和100.00μg/mL]与淋巴细胞于37℃、5%CO2下分别共育4、24和48h,采用双抗夹心酶联免疫法测定培养上清液中的干扰素γ、白介素2和白介素4的浓度,用实时定量PCR法测定脾脏和肠系淋巴结的淋巴细胞中雌激素受体βmRNA表达量。结果表明：1)0.25和1.O0μg/mL的大豆异黄酮与脾脏淋巴细胞共育一定时间后均能显著或极显著提高培养上清液中干扰素γ和白介素2的浓度(P<0.05或P<0.01),48h后,5.00和25.00μg/mL大豆异黄酮能显著抑制脾脏淋巴细胞干扰素γ和白介素2分泌(P<0.05)。2)1.00和5.00μg/mL大豆异黄酮与肠系淋巴结淋巴细胞共育一定时间后干扰素γ和白介素2浓度均显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01)；0.25μg/mL大豆异黄酮趋于增加二者浓度,但差异不显著(P<0.05)；48h后,25.00μg/mL大豆异黄酮抑制了干扰素γ(P<0.05)和白介素2(P<0.05)的分泌。3)与对照组相比,试验组脾脏淋巴细胞白介素4浓度无显著变化(P>0.05),而肠系淋巴结淋巴细胞白介素4浓度显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。4)大豆异黄酮能够提高脾脏淋巴细胞干扰素γ/白介素4的比值,但趋于降低肠系淋巴结淋巴细胞干扰素γ/向介素4。5)大豆异黄酮显著或极显著提高了奶牛脾脏和肠系淋巴结中淋巴细胞雌激素受体β mRNA的表达量(P<0.05或P<0.01),且二者间存在正比的剂量关系。总之,大豆异黄酮能够促进奶牛脾脏和肠系淋巴结中淋巴细胞分泌干扰素γ和白介素2,提高干扰素γ/白介素4,促进雌激素受体β mRNA表达,降低白介素4浓度；低剂量(0.25～5.00μg/mL)的大豆异黄酮能够获得较好免疫促进效果,而高剂量(25.00-100.00μg/mL)更能促进雌激素受体βmRNA表达。

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章绪论  8-16
  1.1 研究的目的和意义  8
  1.2 国内外研究现状分析  8-11
  1.3 大豆异黄酮对免疫的影响  11-13
  1.4 异黄酮植物雌激素在畜禽生产中的作用  13-16
第二章大豆异黄酮对体外培养奶牛淋巴细胞活化与增殖的影响  16-23
  2.1 材料与方法  16-19
  2.2 结果与分析  19-21
  2.3 讨论  21-23
第三章大豆异黄酮对体外培养奶牛淋巴细胞上清液中细胞因子的影响  23-33
  3.1 材料与方法  23-26
  3.2 结果与分析  26-31
  3.3 讨论  31-33
第四章大豆异黄酮对体外培养奶牛淋巴细胞ER-p表达的影响  33-42
  4.1 材料与方法  33-36
  4.2 结果与分析  36-41
  4.3 讨论  41-42
第五章结论  42-43
参考文献  43-49
致谢  49-50
硕士期间论文发表情况  50-51
个人简介  51

大豆异黄酮对奶牛肠系膜淋巴结与脾脏主要免疫指标的影响研究

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