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Hcy，ox-LDL对ER及LDLR基因表达及其甲基化调控的影响

作　者: 黄玉珊
导　师: 王树人
学　校: 四川大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 同型半胱氨酸 氧化型低密度脂蛋白 雌激素α受体 低密度脂蛋白受体 甲基化 动脉粥样硬化
分类号: R543
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是危害人体健康的常见病和多发病，是发达国家最普遍的死因，也是众多发展中国家所面临的增长最快的死因之一。由于AS的发病机理不明确，几十年来对AS的防治尚乏有效的措施，因此深入探讨动脉粥样硬化发病机制，对AS的防治、降低死亡率显得尤为迫切和重要。DNA甲基化是后天性的基因修饰过程，是基因对外界环境因素发生应答的机制之一。越来越多的证据显示，DNA甲基化紊乱出现在多种疾病中，包括肿瘤、某些X-联锁的遗传疾病、自身免疫性疾病及衰老等。目前，在动脉粥样硬化中也发现存在着甲基化异常的现象，而雌激素受体(estrogen receptor，ER)α基因是目前已知的唯一的一个因其启动子区甲基化程度的异常增高，而与动脉粥样硬化的发生发展中相关的基因。高同型半胱氨酸血症和氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)是公认的致动脉粥样硬化的两大危险因素，而这两大危险因素与基因的甲基化调控有无关联呢?低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor，LDLR)作为与动脉粥样硬化发生密切相关的受体，其功能的下降又是否与甲基化的紊乱相关呢?带着这些疑问，我们选择了平滑肌细胞和THP-1单核细胞作为研究对象，使用巢式甲基化敏感性PCR法检测ERα和LDLR基因启动子区的甲基化情况；使用免疫组织化学染色法检测ER的蛋白表达水平；使用酶联免疫吸附法检测LDLR的功能；使用半定量RT-PCR法检测ER和LDLR的mRNA水平；MTT法检测同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)对平滑肌细胞的活力的影响；观察在不同浓度的Hcy和ox-LDL作用不同时间下，平滑肌细胞和THP-1细胞的ERα和LDLR基因启动子区的甲基化状态、ERα和LDLR的蛋白表达水平及其mRNA水平有无变化。实验结果发现ERα基因启动子区的甲基化程度随着Hcy作用浓度及作用时间的增加而增加，并且随着其甲基化程度的增加，免疫组化结果显示ERα的蛋白表达水平也随之下降，RT-PCR结果显示ERα的mRNA表达水平亦随之下降；MTT结果显示平滑肌细胞在Hcy作用下随着ERα活性的下降而出现增殖的现象；LDLR基因启动子区的甲基化在Hcy作用下未发现明显变化；ERα基因在低浓度的ox-LDL作用下，从原来的去甲基化状态转化为部分甲基化状态，但在高浓度的ox-LDL作用下，又恢复去甲基化状态；ox-LDL对LDLR基因的甲基化并无明显的影响。因此认为Hcy具有一定的促甲基化的作用，但这种作用具有一定的基因特异性，对ERα基因表现出明显作用，但对LDLR基因作用不明显；ox-LDL对甲基化的调控作用不明显。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-15
第一部分 巢式甲基化特异性的PCR方法的建立及其可靠性的检验  15-32
  引言  15-16
  材料与方法  16-28
  结果  28-31
  讨论  31-32
第二部分 Hcy对ERα基因启动子区甲基化及其表达的影响  32-48
  引言  32-33
  材料与方法  33-40
  结果  40-46
  讨论  46-48
第三部分 Hcy对LDLR基因启动子区甲基化的影响  48-54
  引言  48
  材料与方法  48-50
  结果  50-52
  讨论  52-54
第四部分 ox-LDL对ERα基因启动子区甲基化的影响  54-67
  引言  54-55
  材料与方法  55-62
  结果  62-66
  讨论  66-67
第五部分 ox-LDL对LDLR基因启动子区甲基化及其表达的影响  67-77
  引言  67-68
  材料与方法  68-73
  结果  73-76
  讨论  76-77
全文总结  77-79
参考文献  79-92
综述  92-107
  参考文献  101-107
附录  107-109
致谢  109-110

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血管疾病
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