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人胚胰腺导管上皮细胞的体外长期培养及永生化

作　者: 侯敏
导　师: 陈元方；柯杨；陆星华
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 消化内科
关键词: 转化细胞上皮细胞永生化细胞传代培养体外长期培养细胞原代培养细胞永生化原代培养细胞细胞团细胞转化
分类号: R329.2
类　型: 博士论文
年　份: 1997年
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内容摘要

有关人的胰腺导管上皮细胞的生理功能调节、受体分布、基因表达调控、癌变机制等方面的研究，仍是较为薄弱的领域，其中最重要的原因是分离培养以胰腺导管上皮细胞为主的细胞群十分困难，特别是体外长期培养的问题至今没有解决。基于本领域研究工作的迫切需要，我们进行了这方面的工作。首先，采用胶原酶消化的方法，分离人胚(中期引产的胎儿，20-30周)胰腺上皮细胞为细胞团，将10％FBS完全培基加入到这些细胞团中，接种至50ml塑料培养瓶，24小时后换2％FBS完全培基进行原代培养。经过近20个胎儿的胰腺标本的分离培养，摸索出了适合于胰腺导管上皮细胞原代培养的方法和条件。若原代培养的细胞不传代，其生活状态可维持长达2月之久；也可以传代，传第3代的细胞仍以上皮细胞为主，细胞生长良好。对原代培养细胞进行了初步的鉴定，结果为培养77、96小时的原代细胞，淀粉酶检测阴性，Cytokeratin免疫细胞化学染色阳性，说明原代培养的细胞为导管上皮细胞而非腺泡细胞，为进行体外转化奠定了基础。在成功地建立胰腺导管上皮细胞原代和传代培养的基础上，利用SV40 T基因掺入细胞基因组DNA后可以造成细胞转化，使转化细胞能够在体外长期传代培养的特性，将载有SV40 T基因的质粒pSV-T，通过脂质体Lipofectin介导，转染原代和传代(第3代)培养的胰腺导管上皮细胞，经过2-7周的筛选，终于

全文目录

英文缩略词  4-5
摘要  5-8
Abstract  8-12
前言  12-14
材料与方法  14-38
  一、材料  14-18
  二、技术路线  18-19
  三、方法  19-38
结果  38-66
  一、原代及传代培养的人胰腺导管上皮细胞的生长  38-40
  二、原代培养细胞的初步鉴定  40-41
  三、原代和传代培养细胞的转染，以及转化细胞的筛选、分离、扩大培养和传代培养  41-43
  四、转化细胞的细胞、分子生物学鉴定  43-48
  五、附图  48-66
讨论  66-72
  一、人胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养  67-69
  二、正常细胞的体外转染的转化  69-70
  三、转化细胞的细胞、分子生物学鉴定  70-71
  四、细胞危象的问题  71-72
小结  72-80
Minireview  80-94
致谢  94

人胚胰腺导管上皮细胞的体外长期培养及永生化

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