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性激素对小鼠免疫的影响

作　者: 吴丽华
导　师: 胡松华
学　校: 浙江大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 小鼠免疫 性激素水平 人参皂甙 脾淋巴细胞 细胞因子 雄激素受体 免疫应答 雌性小鼠 雌鼠 小鼠血清 mRNA 淋巴细胞增殖 表达水平 特异性抗体 雌二醇 抑制剂 淋巴细胞转化 雌激素活性 加强免疫 雄性小鼠
分类号: S852.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


传染性疾病的防控一直是规模养殖场的工作重点,疫苗接种是预防传染病的有效方法之一,但免疫失败的情况仍时有发生,给畜牧业造成了巨大的经济损失。畜禽机体产生免疫应答是一个复杂的,受多种因素影响的过程,在影响机体免疫应答能力的诸多因子中,性激素的作用不可忽视。本论文研究了外源性雌激素、外源性雄激素以及异性对小鼠免疫应答的影响,为在实践中如何增强机体的免疫应答作用提供参考。1、外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响目的观察雌二醇和具有雌激素样作用的人参皂甙Rb1和Rg1对雌鼠的免疫应答的影响。方法将72只ICR小鼠随机分为9组,每组8只。给抑制剂对照组连续一周经腹股沟皮下注射ICI182,780(氟维斯群)(200μg/d)后,各组分别按如下方案进行免疫：组1：生理盐水；组2:OVA(10μg);组3:200μg ICI(注射含10gμOVA和200μg ICI的混合疫苗,下同)；组4：30μg雌二醇(E2)；组5:30μg E2+200μg ICI;组6:50μg Rb1;组7:50μg Rb1+200μg ICI;组8：50μg Rg1;组9:50μg Rg1+200μg ICI。3周后加强免疫一次,方法同前。在免疫后2周采血测血清抗OVA特异性抗体IgG及其亚类水平；无菌分离脾淋巴细胞后,采用MTT法检测淋巴细胞增殖；RT-PCR法测定脾淋巴细胞表达细胞因子mRNA的水平。结果外源雌激素(E2)可以提高小鼠的抗OVA特异性抗体水平以及抗体亚类IgG1水平,细胞因子(IFN-γ、IL-12、IL-4和IL-10)和转录因子(T-bet和GATA-3)的mRNA表达水平,且均显著高于其抑制剂对照组。具有雌激素样作用的人参皂甙Rg1、Rb1可以提高小鼠抗OVA特异性抗体IgG和抗体亚类水平,显著促进脾脏淋巴细胞增殖能力和4种细胞因子和2种转录因子的mRNA表达水平,且均显著高于或稍高于各自的抑制剂对照组。结论雌激素和人参皂甙Rg1、Rb1都具有免疫调节作用,雌激素主要促进Th2型免疫应答,人参皂甙可促进Th1和Th2型免疫应答。雌激素和人参皂甙Rg1、Rb1的免疫调节作用与雌激素受体存在一定关联。2、外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响目的观察睾酮(Te)对小鼠的免疫应答的影响,同时运用雄激素受体拮抗剂氟他胺,研究人参皂甙的免疫调节作用是否与雄激素受体有关。方法将72只ICR小鼠随机分为9组,每组8只。对抑制剂对照组连续一周经腹股沟皮下注射氟他胺(300μg/d)后,各组分别按如下方案进行免疫：组1：生理盐水；组2:OVA (10μg)；组3:300μg Flu(注射含10μg OVA和300μg Flu的混合疫苗,下同)；组4：50μg Te;组5:50μg Te+300μg Flu;组6:50μg Rb1;组7:50μg Rb1+300μgFlu；组8:50μg Rg1;组9:50μg Rg1+300μg Flu.3周后加强免疫一次,方法同前。在免疫后2周采血测血清抗OVA特异性抗体IgG及其亚类水平；无菌分离脾淋巴细胞后,采用MTT法检测淋巴细胞增殖；RT-PCR法测定脾淋巴细胞表达细胞因子mRNA的水平。结果外源雄激素不能提高小鼠抗OVA特异性抗体和各抗体亚类水平以及淋巴细胞转化能力,且与雄激素抑制剂对照组未形成显著差异；人参皂甙Rg1、Rb1可以提高小鼠抗OVA特异性免疫应答水平,但较其雄激素抑制剂对照组无显著差异。结论雄激素不能上调机体对抗原注射的免疫应答反应,且与雄激素受体之间的关联性不明显。人参皂甙的免疫调节作用与雄激素受体无关。3、同种异性小鼠对免疫反应的影响目的观察同种异性对小鼠激素水平及其对免疫反应的影响。方法实验一：将30只ICR雌鼠随机分成3组,每组10只,第3组中添加一只雄鼠(为防止雌鼠怀孕,在试验前对此雄鼠实行了输精管结扎术)。实验二：将30只ICR雄鼠随机分成3组,每组10只,第3组多一只雌鼠。分别注射生理盐水(组1)或OVA(组2,组3),3周后加强免疫一次,方法同前。2免后2周眼眶采血,双抗体夹心ABC-ELISA法检测小鼠血清中雌二醇(E2)和睾酮(Te)的含量；间接ELISA法检测血清抗OVA抗体水平；无菌分离脾淋巴细胞后,RT-PCR法测定脾淋巴细胞表达细胞因子mRNA的水平。结果异性小鼠可使雌、雄性小鼠血清中雌二醇水平显著提高而睾酮并无显著变化,雌雄小鼠的抗OVA特异性IgG抗体水平均显著提高,雌鼠Th1类的细胞因子(IFN-γ和IL-12)和转录因子T-bet的mRNA表达水平下降以及Th2类的细胞因子(IL-4和IL-10)和转录因子GATA-3的mRNA表达水平显著提高；雄鼠Th1类细胞因子和转录因子的mRNA表达水平上升,而Th2类细胞因子和转录因子的mRNA表达水平则下降。结论雄性小鼠混合饲养,雌性小鼠的Th2型免疫应答增强,而Th1型免疫应答受到抑制；而和雌性小鼠混合饲养,雄性小鼠的Th1型免疫应答增强,Th2型免疫应答受到抑制。

全文目录


摘要  7-10
Abstract  10-13
第一部分 文献综述  13-24
  第一章 性激素对免疫功能的影响  13-24
    1 性激素对免疫的影响  13-16
      1.1 雌激素对免疫的影响  13-14
      1.2 雄激素对免疫的影响  14-15
      1.3 孕激素对免疫的影响  15-16
    2 抗性激素药物  16-18
      2.1 抗雌激素药物  16-17
      2.2 抗雄激素药物  17-18
    3、人参皂甙的雌激素样作用  18-21
    4、本研究的目的意义和研究内容  21-24
第二部分 实验研究  24-57
  第二章 外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响  24-36
    1.材料  24-25
      1.1 试验动物  24
      1.2 抗原与佐剂  24-25
      1.3 试剂和仪器  25
    2.方法  25-32
      2.1 疫苗、佐剂配制  25-26
      2.2 分组和免疫程序  26
      2.3 淋巴细胞增殖的检测  26-27
      2.4 血清特异性抗体的测定  27-28
      2.5 细胞因子的RT-PCR法测定  28-31
      2.6 数据分析  31-32
    3、结果  32-35
      3.1 外源雌激素对血清特异性抗体的影响  32-33
      3.2 外源雌激素对淋巴细胞体外增殖的影响  33-34
      3.3 外源雌激素对淋巴细胞产生细胞因子mRNA水平的影响  34-35
      3.4 外源雌激素对淋巴细胞产生转录因子mRNA水平的影响  35
    4、本章小节  35-36
  第三章 外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响  36-43
    1、材料  36-37
      1.1 试验动物  36
      1.2 抗原与佐剂  36
      1.3 试剂和仪器  36-37
    2.方法  37-38
      2.1 疫苗、佐剂配制  37
      2.2 分组和免疫程序  37-38
      2.3 淋巴细胞增殖的检测  38
      2.4 血清特异性抗体及其亚类的测定  38
      2.5 细胞因子的RT-PCR法测定  38
      2.6 数据分析  38
    3、结果  38-42
      3.1 外源雄激素对血清特异性抗体的影响  38-40
      3.2 外源雄激素对淋巴细胞体外增殖的影响  40-41
      3.3 外源雄激素对淋巴细胞产生细胞因子基因mRNA水平的影响  41-42
      3.4 外源雄激素对淋巴细胞产生转录因子基因mRNA水平的影响  42
    4、本章小节  42-43
  第四章 同种异性对免疫反应的影响  43-53
    1、材料  43-44
      1.1 试验动物  43
      1.2 抗原  43
      1.3 试剂和仪器  43-44
    2.方法  44-48
      2.1 伴侣雄鼠的输精管结扎  44-45
      2.2 分组和免疫程序  45-46
      2.3 血清特异性抗体的测定  46
      2.4 双抗体夹心ABC-ELISA法定量测定小鼠血清中的性激素激素含量  46-48
      2.5 细胞因子的RT-PCR法测定  48
    3、结果与分析  48-52
      3.1 同种异性小鼠混合饲养对血清中性激素水平的影响  48-49
      3.2 同种异性小鼠混合饲养对血清特异性抗体水平的影响  49-50
      3.3 同种异性对淋巴细胞产生细胞因子mRNA水平的影响  50-51
      3.4 同种异性对淋巴细胞产生转录因子mRNA水平的影响  51-52
    4、本章小节  52-53
  第五章 综合讨论  53-57
    1、外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响  53-54
    2、外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响  54-55
    3、同种异性对免疫应答的影响  55-57
结论  57-58
创新点  58-59
后续研究展望  59-60
参考文献  60-65
附录 常用试剂配方  65-67
致谢  67-68
攻读硕士学位期间主要的研究成果  68

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜免疫学
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