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和美酵素对断奶仔猪生产性能的影响及其机理研究

作　者: 黄爱霞
导　师: 邹晓庭
学　校: 浙江大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 和美酵素生长性能免疫功能淋巴细胞转化肠道消化酶胰腺消化酶抗氧化酶 RT-PCR 胃泌素断奶仔猪
分类号: S828.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本试验选取28日龄断奶仔猪150头,随机分成4组,每组三个重复,每个重复15头,对照组饲喂基础日粮；试验组1饲喂基础日粮+0.025%和美酵素；试验组2饲喂基础日粮+0.05%和美酵素；试验组3饲喂基础日粮+0.075%和美酵素。试验猪自由采食和饮水,正常免疫,试验期36天。在试验结束时称取每头猪的重量,然后从添加和美酵素0.05%组及对照组各选接近于平均体重的6头猪,每个重复2头(公母各一),进行屠宰,取血样分离血清,进行常规血清生化指标、激素、免疫球蛋白和补体的分析；取全血做T-淋巴细胞转化实验,研究外周血淋巴细胞在ConA和LPS诱导下的转化率；取十二指肠内容物和胰脏分析其消化酶的活性；取十二指肠、空肠和回肠,制作光镜切片,观察小肠绒毛高度和固有膜厚度；取肝脏测定肝脏中抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性；取胃窦克隆胃泌素基因,并用RR-PCR法研究饲粮中添加和美酵素对断奶仔猪胃窦胃泌素基因表达的影响。主要研究结果如下：1.生长指标结果表明：(1)平均日采食量,与对照组相比,添加和美酵素组平均日采食量无显著差异。(2)平均日增重,与对照组相比添加0.025%、0.05%和0.075%和美酵素组高3.9%(p>0.05)、10.4%(p>0.05)和2.5%(p>0.05)。(3)料重比,与对照组相比,添加0.025%、0.05%和0.075%水平的和美酵素组料重比分别下降了3.1%(P<0.05)、6.3%(P<0.05)和5.5%(P<0.05),说明添加和美酵素可以提高仔猪对饲料的利用率。2.血清生化指标结果表明：(1)常规血清生化指标,添加0.05%和美酵素组的血清中总蛋白的含量比对照组的要低1.7%(p>0.05)。与对照组相比,添加0.05%的和美酵素组的血清中白蛋白的含量降低了11.7%(p>0.05)。碱性磷酸酶含量,添加0.05%和美酵素组比对照组高11.4%(p>0.05)。钙含量,添加0.05%和美酵素组要比对照组低10.8%(p>0.05)。与对照组相比,添加和美酵素0.05%组的磷含量比对照组高4.8%(p>0.05)。(2)生长相关激素指标,胰岛素和胰岛素样生长因子的水平,添加0.05%和美酵素组与对照组相比分别升高了4.6%(p>0.05)和12.3%(p>0.05)。T3含量,与对照组相比添加和美酵素组提高了55.6%(p>0.05)。3.免疫指标结果显示：(1)免疫器官指数,添加和美酵素0.05%组的脾脏指数比对照组的降低了8.4%,但是差异不显著(p>0.05)。(2)血清免疫球蛋白含量,各组间血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、C3和C4的水平,添加0.05%和美酵素组分别比对照组提高了48.4%(p>0.05)、15.0%(p>0.05)、8.8%(p>0.05)、5.2%(p>0.05)和60.5%(P<0.01)。(3)添加0.05%和美酵素组与对照组的淋巴细胞转化率在ConA和LPS诱导下分别增高了19.8%(p>0.05)和19.2%(p>0.05)。4.十二指肠消化酶结果显示：添加和美酵素0.05%组的总蛋白水解酶和脂肪酶与对照组相比分别降低了1.4%(p>0.05)和65.9%(p>0.05)。淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶,添加和美酵素0.05%组与对照组相比分别升高了0.7%(p>0.05)、57..6%(p>0.05)和96.9%(p>0.05)。5.光镜切片观察结果表明试验组十二指肠固有膜厚度与对照组相比差异显著(p<0.05)。试验组空肠固有膜厚度和回肠的绒毛高度与对照组相比差异极显著(p<0.01)。6.胰腺消化酶结果显示：与对照组相比,添加和美酵素0.05%组,总蛋白水解酶含量升高了37.3%(p<0.05)。淀粉酶和脂肪酶活性添加和美酵素0.05%组与对照组相比分别增加了10.4%(p<0.01)和143.7%(p<0.01)。胰蛋白酶和糜蛋白酶含量与对照组相比,添加和美酵素0.05%组分别降低了86.7%(p<0.05)和19.8%(p>0.05)。7.肝脏组织抗氧化酶结果显示：与对照组相比添加和美酵素0.05%组的SOD活性升高了54.5%(P<0.05),GSH-Px活性增加了10.6%(p>0.05)。8.血清中胃泌素含量和胃窦中胃泌素基因mRNA表达量的测定结果表明：血清中胃泌素含量,添加0.05%和美酵素组与对照组相比提高了41.4%(p>0.05)。0606与对照相比,添加0.05%和美酵素组胃泌素mRNA的表达量提高了25.3%(p<0.05)。本研究揭示：在断奶仔猪日粮中添加和美酵素能够提高断奶仔猪的生长性能、饲料利用率和免疫功能；提高仔猪血清中总蛋白、白蛋白含量、降低尿素氮含量,促进机体蛋白质的沉积；提高了血清中胰岛素、胰岛素样生长因子和T3的含量；增加了肝脏SOD和GSH-Px的活性,这说明和美酵素提高了断奶仔猪的抗氧化能力。日粮中添加和美酵素能够增加小肠绒毛高度,提高十二指肠消化酶的活性,从而提高饲料的利用率；促进了仔猪胃窦胃泌素基因的表达,提高了血清中的胃泌素含量。

全文目录

致谢  4-8
英文缩略词  8-9
摘要  9-12
第一章综述  12-24
  1 NSP抗营养作用的机理  13-15
    1.1 NSP增加肠道食糜粘度  13-14
    1.2 NSP阻碍营养物质释放  14
    1.3 NSP影响消化酶活性,刺激消化器官代偿性增大  14-15
    1.4 促进肠道内有害菌过度增殖,损害肠道粘膜正常形态  15
  2 β-甘露聚糖的抗营养作用  15-16
  3 和美酵素的作用效果  16-18
    3.1 改善畜禽生长性能  17
    3.2 改善家禽产蛋性能  17
    3.3 提高家禽的体重均匀度  17-18
    3.4 改善畜禽健康状况  18
    3.5 具有替代抗生素、降低畜产品中抗生素残留的作用  18
  4 和美酵素的作用机理  18-22
    4.1 和美酵素降解β-甘露聚糖,提高饲料的消化率  18-19
    4.2 和美酵素降解β-甘露聚糖为甘露寡糖,甘露寡糖能改善肠道微生态环境,提高动物免疫功能  19-22
      4.2.1 甘露寡糖对动物胃肠道微生物区系的影响  19-21
        4.2.1.1 甘露寡糖对有害菌的识别及清除作用  19-20
        4.2.1.2 甘露寡糖对有益菌的作用  20-21
      4.2.2 甘露寡糖增强动物机体的免疫性能  21-22
        4.2.2.1 甘露寡糖对动物体液免疫的影响  21
        4.2.2.2 甘露寡糖对动物细胞免疫的影响  21-22
    4.3 和美酵素显著提高动物胰岛素样生长因子水平  22
  5 有待于进一步探讨的问题  22-23
  6 本课题研究内容与目标  23-24
    6.1 研究目标  23
    6.2 研究内容  23-24
第二章材料与方法  24-40
  1 实验材料  24-26
    1.1 实验材料  24
    1.2 实验动物  24
    1.3 试验地点  24
    1.4 试验设计和日粮  24-26
      1.4.1 试验设计  24-25
      1.4.2 试验基础日粮配方及营养水平  25-26
  2 实验方法  26-39
    2.1 饲养试验  26
    2.2 屠宰实验  26
    2.3 样品的收集和保存  26-27
    2.4 指标测定  27-39
      2.4.1 生长性能的测定  27
      2.4.2 血清生化指标测定  27-28
        常规血清生化指标测定  27
        生长相关激素  27-28
      2.4.3 免疫指标测定  28-30
        免疫器官指数  28
        血清免疫球蛋白含量、补体(C3、C4)含量测定  28
        外周血淋巴细胞转化试验  28-30
      2.4.4 肠道相关指标测定  30-34
        肠道消化酶活性的测定  30-33
        切片的制作及绒毛长度的测定  33-34
      2.4.5 胰腺组织消化酶的测定  34
      2.4.6 肝脏组织抗氧化酶活性的测定  34-35
      2.4.7 断奶仔猪胃泌素基因和18SrRNA基因克隆  35-39
        2.4.7.1 基因克隆策略程序如下  35-36
        2.4.7.2 试验试剂  36
        2.4.7.3 断奶仔猪胃窦总RNA的提取  36
        2.4.7.4 甲醛变性电泳  36-37
        2.4.7.5 PCR产物电泳  37-38
        2.4.7.6 PCR产物割胶回收  38
        2.4.7.7 PCR割胶回收产物与pUCm-T Vector载体连接  38
        2.4.7.8 转化  38-39
          2.4.7.8.1 感受态细胞制备(CaCl_2法)  38-39
          2.4.7.8.2 热激转化  39
          2.4.7.8.3 重组克隆筛选  39
          2.4.7.8.4 测序  39
  3 数据处理与分析  39-40
第三章试验结果  40-55
  1 和美酵素对断奶仔猪生长性能的影响  40
  2 和美酵素对断奶仔猪血清生化指标的影响  40-42
    2.1 和美酵素对断奶仔猪常规血清生化指标的影响  40-41
    2.2 和美酵素对断奶仔猪生长相关激素的影响  41-42
  3 和美酵素对断奶仔猪免疫功能的影响  42-43
    3.1 和美酵素对断奶仔猪脾脏指数的影响  42
    3.2 和美酵素对断奶仔猪血清免疫球蛋白和C3、C4的影响  42-43
    3.3 和美酵素对断奶仔猪血液淋巴细胞转化率的影响  43
  4 和美酵素对断奶仔猪肠道指标的影响  43-46
    4.1 和美酵素对断奶仔猪肠道消化酶的影响  43-44
    4.2 和美酵素对断奶仔猪小肠绒毛长度和固有膜厚度的影响  44-46
      4.2.1 和美酵素对断奶仔猪小肠绒毛长度的影响  44-45
      4.2.2 十二指肠、空肠、回肠光镜观察  45-46
        4.2.2.1 十二指肠光镜观察(5×10)  45
        4.2.2.2 空肠光镜观察(5×10)  45-46
        4.2.2.3 回肠光镜观察(5×10)  46
  5 和美酵素对断奶仔猪胰腺消化酶的影响  46-47
  6 和美酵素对断奶仔猪肝脏组织抗氧化酶的影响  47
  7 和美酵素对胃泌素的影响  47-55
    7.1 和美酵素对断奶仔猪血清胃泌素含量的影响  47-48
    7.2 胃窦中胃泌素基因和18SrRNA基因的克隆与测序  48-51
      7.2.1 胃泌素基因的克隆  48-50
        7.2.1.1 胃泌素基因RT-PCR产物电泳结果  48
        7.2.1.2 菌液DNA PCR检验结果  48-49
        7.2.1.3 胃泌素测序结果  49-50
        7.2.1.4 同源性分析比较结果  50
      7.2.2 18S基因阳性克隆子测序结果  50-51
    7.3 RT-PCR方法研究和美酵素对断奶仔猪胃泌素基因表达的影响  51-55
      7.3.1 优化的PCR反应体系的确定  51-52
        7.3.1.1 MgCl_2浓度对18SrRNA和胃泌素基因扩增效率的影响  51
        7.3.1.2 循环数对平台期的影响  51-52
      7.3.2 和美酵素对断奶仔猪胃泌素mRNA表达量的影响  52-55
第四章讨论  55-64
  1 和美酵素对断奶仔猪生长性能的影响  55-56
  2 和美酵素对断奶仔猪血清生化指标的影响  56-58
    2.1 和美酵素对断奶仔猪常规血清生化指标的影响  56-57
    2.2 和美酵素对断奶仔猪相关生长激素的影响  57-58
  3 和美酵素对断奶仔猪免疫性能的影响  58-60
    3.1 和美酵素对断奶仔猪免疫器官指数的影响  58
    3.2 和美酵素对断奶仔猪血清免疫球蛋白和补体含量的影响  58-59
    3.3 和美酵素对断奶仔猪外周血淋巴细胞转化率的影响  59-60
  4 和美酵素对断奶仔猪肠道相关指标的影响  60-61
    4.1 和美酵素对断奶仔猪肠道消化酶活性的影响  60
    4.2 和美酵素对断奶仔猪肠绒毛长度的影响  60-61
  5 和美酵素对胰腺消化酶活性的影响  61
  6 和美酵素对断奶仔猪肝脏组织抗氧化酶活性的影响  61-62
  7 和美酵素对胃泌素的影响  62-64
    7.1 和美酵素对断奶仔猪血清胃泌素含量的影响  62
    7.2 和美酵素对断奶仔猪胃窦中胃泌素基因表达的影响  62-64
小结  64
创新点  64-65
参考文献  65-75
Abstract  75-77

和美酵素对断奶仔猪生产性能的影响及其机理研究

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