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1. 人睾丸特异核孔蛋白BS-63的功能研究 2. 应用酵母双杂交寻找HSD-1编码蛋白（hSMP-1）的结合物

作　者: 才迎
导　师: 缪时英；王琳芳
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生物化学
关键词: 核孔蛋白医科大学博士学位论文结果与分析蛋白质阳性克隆生精细胞编码蛋白协和结构域
分类号: Q51
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
下　载: 62次
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内容摘要

精子从发生到成熟的过程中受到多种蛋白质的调节，而这些表达具有严格的时间性和空间性的调节蛋白往往是睾丸生精细胞所特有的。因而，揭示这些睾丸生精细胞特异表达蛋白的功能对于阐明精子发生的机理是极其重要的。 BS-63是本实验组从睾丸λZAPⅡ cDNA文库中运用克隆筛选、5’RACE结合PCR的方法获得的一个人睾丸特异的核孔蛋白。其cDNA开放阅读框架编码1765个氨基酸。通过NCBI网站的BLASTn工具软件比较发现其与人Hela细胞cDNA表达文库中筛选出的核孔蛋白Nup358／RanBP2高度同源。不同之处在于：BS-63缺乏部分Nup358的cDNA序列，范围在第2812位核苷酸至5340位核苷酸，共2928bp：BS-63的C末端编码区不仅较Nup358短1449bp，而且有375bp核苷酸与Nup358完全不同；BS-63的3’非编码区为106bp，也较Nup358的3’非编码区的889bp核苷酸短。除此之外，BS-63的核苷酸序列与Nup358的核苷酸序列非常相似。在BS-63编码的1765个氨基酸中具有核孔蛋白的特征基序XFXFG或GLFG。采用免疫胶体金标透射电镜和免疫胶体金、银标记的扫描电镜分别对睾丸组织和精子细胞进行BS-63的表达定位。扫描电镜结果显示，于脱去细胞膜和细胞质的精子的核膜上有散在的圆形的金、银颗粒标记物。在部分尚未去除的精子细胞膜上则无此金、银颗粒出现。透射电镜结果显示，于睾丸的生精细胞核膜孔处有三五成群的金颗粒出现。说明BS-63存在于核膜孔上。据此，我们认为BS-63是Nup358在睾丸组织中特殊的表达形式，是人睾丸特异的一种核孔蛋白。我们知道，在细胞核中转录产生的mRNA前体经剪接后成为成熟的mRNA，然后在细胞质中翻译出相应的蛋白质。一些重要的调节蛋白则由核孔蛋白再转运至核内发挥其调控功能。生精干细胞经过有丝分裂、减数分裂最终分化发育为成熟的精子是一个高度有序的过程，在此过程中调节相应基因顺序表达的调节蛋白起着极为关键的作用。BS-63是人睾丸特异的核孔蛋白，我们非常想知道，BS-63的入核转运物是什么?它是否也为睾丸特异表达的蛋白质，以及它在精子发生过程中如何发挥作用。为此，我们利用酵母双杂交技术，分别以BS-63C末端0.5 Kb、1.6Kb编码蛋白为诱饵蛋白，筛选睾丸文库pGAD10中与BS-63相互作用的蛋白质。结果发现核孔蛋白BS-63可与Transportin、Ran以及AF10相作用。Transportin与Ran是与细胞核、质转运密切相关的两个蛋白质。此结果再一次表明BS-63确是一个核孔蛋白。AF10是一个转录因子样蛋白，其N端有半胱氨酸富含区、LAP／PHD锌指；其C端有亮氨

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
前言  10-13
材料与方法  13-36
结果与分析  36-88
讨论  88-97
小结  97-99
参考文献  99-105
文献综述  105-125
附录  125-131
致谢  131

1. 人睾丸特异核孔蛋白BS-63的功能研究 2. 应用酵母双杂交寻找HSD-1编码蛋白（hSMP-1）的结合物

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