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抗乙型肝炎病毒药物靶标的筛选和验证

作　者: 杨静
导　师: 王升启
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药物分析
关键词: 乙型肝炎病毒(HBV) 基因表达谱芯片药物作用靶点反义寡核苷酸
分类号: R965.1
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 366次
引　用: 1次
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内容摘要

乙型肝炎病毒感染严重影响人类的健康和生命安全,目前没有特效防治方法。存在的关键问题在于HBV基因组较小,易发生突变,限制了靶向病毒的抗病毒药物的发展。最近的研究表明,抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以阻断病毒感染。与病毒基因组相比,人类基因组序列中可能包括更多与病毒复制有关的基因。应用DNA微阵列(芯片)技术系统分析宿主基因表达,是一种从宿主细胞中发现潜在抗病毒靶标的有效方法。因此,本课题旨在应用基因芯片技术筛选和验证宿主细胞内潜在的抗HBV药物作用靶标,为新型抗病毒药物的筛选奠定基础。本研究首先制备了芯片通用型阳性对照,并对芯片的特性进行了简要分析,在此基础上制备了病毒感染相关基因表达谱芯片。应用此芯片比较了HepG2.2.15细胞与HepG2细胞表达谱差异,并研究了HepG2.2.15细胞经抗HBV药物干预前后细胞基因表达谱变化情况,筛选出在HBV感染后差异表达、而药物干预后表达逆转的基因,获得了可能的HBV感染关键分子。通过RT-PCR、Western印迹技术验证以及生物信息学分析发现ASGPR1、fibronectin可能成为肝细胞内潜在的抗HBV药物作用靶标。在此基础上,应用反义技术、配基、抗体、小分子化合物等途径抑制肝细胞中ASGPR1、fibronectin的表达或功能,发现HepG2.2.15细胞内HBV的复制受到明显抑制,为证明ASGPR1和fibronectin成为抗HBV药物作用靶点的可能性提供了有力证据。综上所述,本研究通过筛选和初步验证确定ASGPR1、fibronectin可能成为抗HBV药物的新型作用靶点。

全文目录

英文缩写字中英文全称对照表  5-7
中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
前言  10-13
实验材料  13-20
第一部分病毒感染相关基因表达谱芯片的制备和质量控制  20-33
  第一节基因芯片阳性对照的制备及特性分析  20-27
    一、方法  21-23
    二、结果  23-25
    三、讨论  25-27
  第二节病毒感染相关基因表达谱芯片的制备和质量控制  27-32
    一、方法  28-29
    二、结果  29-31
    三、讨论  31-32
  第三节总结  32-33
第二部分 HBV感染功能相关基因筛选和差异表达水平验证  33-53
  第一节 HBV感染功能相关基因筛选  33-42
    一、方法  33-34
    二、结果  34-40
    三、讨论  40-42
  第二节 HBV感染功能相关基因差异表达水平验证  42-51
    一、方法  43-45
    二、结果  45-50
    三、讨论  50-51
  第三节总结  51-53
第三部分抗HBV药物潜在靶点的可药性验证  53-84
  第一节抑制ASGPR1表达的反义寡核苷酸可阻断HBV的复制  53-66
    一、方法  53-56
    二、结果  56-64
    三、讨论  64-66
  第二节纤连蛋白——抗HBV药物的潜在靶点  66-83
    一、方法  66-68
    二、结果  68-80
    三、讨论  80-83
  第三节总结  83-84
全文总结  84-86
参考文献  86-90
附表1 病毒感染相关基因探针列表  90-101
附表2 相关基因在拉米夫定处理后不同时间点的相对表达水平列表  101-107
附表3 相关基因在阿地福韦处理后不同时间点的相对表达水平列表  107-113
附表4 相关基因在IBE5处理后不同时间点的相对表达水平列表  113-119
文献综述  119-124
致谢  124-125
个人简历  125-127
代表性论文全文  127-133

抗乙型肝炎病毒药物靶标的筛选和验证

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