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急性胰腺炎患者血浆DNA定量分析和基因表达谱研究

作　者: 刘央央
导　师: 陈卫昌
学　校: 苏州大学
专　业: 消化内科
关键词: 急性胰腺炎 血浆DNA 基因表达谱芯片 实时定量PCR
分类号: R576
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


第一部分:急性胰腺炎患者血浆DNA定量分析及其临床意义目的定量检测急性胰腺炎病人外周血血浆DNA含量并初步探讨其临床应用价值。方法收集40例轻症急性胰腺炎(MAP)、20例重症急性胰腺炎(SAP)以及50例健康体检者的外周静脉血,采用“微量基因组DNA提取试剂盒”提取血浆DNA,以实时荧光定量PCR方法检测各组血浆DNA的含量,比较分析血浆DNA水平与急性胰腺炎的临床相关性,并作受试者工作特性(ROC)曲线。结果(1)SAP组、MAP组和健康对照组血浆DNA含量的中位数分别为24.84ng/ml、7.60ng/ml和5.23ng/ml,三组之间差异有统计学意义(P=0.000);(2)60例急性胰腺炎患者血浆DNA含量明显高于健康对照组(P=0.006);SAP组明显高于MAP组及健康对照组(P=0.006, P=0.000),而MAP组与健康对照组之间则无明显差异(P=0.322);(3)以SAP组与MAP组血浆DNA含量所作的受试者工作特性(ROC)曲线下面积为0.881(95%可信区间为0.773～0.989),以血浆DNA≥11.20ng/ml作为临界值,血浆DNA对重症急性胰腺炎诊断的敏感性为95%,特异性为72.5%;(4)血浆DNA水平与急性胰腺炎患者APACHE-评分、Ranson评分、血清Ca2+浓度、血清CRP水平密切相关(P=0.001, P=0.013, P=0.000, P=0.001),而与住院天数及外周血白细胞数无明显相关性(P=0.215, P=0.161)。结论血浆DNA水平与急性胰腺炎患者病情严重程度密切相关,有可能成为急性胰腺炎患者病情监测和重症急性胰腺炎早期诊断的一个重要指标。第二部分:急性胰腺炎患者外周血单个核细胞的基因表达谱研究目的分析急性胰腺炎病人外周血单个核细胞的基因表达谱变化,初步探讨重症急性胰腺炎发病的分子机制。方法以重症急性胰腺炎(SAP)、轻症急性胰腺炎(MAP)以及健康体检者作为研究对象,分别收集外周静脉血,以Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,提取总RNA,采用基因表达谱芯片Affymetrix U133A 2.0及数据处理软件分别筛选出SAP患者较MAP患者与健康体检者的差异表达基因,将两组数据进行交集分析,获得共同改变的差异基因作为SAP相关的基因表达模式,应用生物信息学方法对其进行分析,并使用Real-Time PCR方法对部分筛查结果进行验证。结果SAP与健康体检者比较,差异表达基因(2倍以上)共2574个,其中上调的基因有1193个,下调的基因有1381个;SAP与MAP比较,差异表达基因共755个,其中上调的基因有480个,下调的基因有275个。经过交集分析,筛选出SAP相关的显著性差异基因共413个,作为SAP相关的基因表达模式,其中包括305个上调基因和108个下调基因,这些相关基因的功能涉及生物调节、应激信号处理、免疫应答、细胞死亡、细胞粘附等方面。结论应用基因表达谱芯片,初步筛选出SAP与健康体检者之间的差异表达基因,为探讨SAP的发病机制提供了候选基因。同时筛选出SAP与MAP之间的差异表达基因,经过交集分析获得SAP相关的基因表达模式,考虑这部分基因可能与SAP的发生、发展密切相关。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-14
  参考文献  11-14
第一部分 急性胰腺炎患者血浆DNA 定量分析及其临床意义  14-29
  一 实验材料  14-16
  二 方法  16-18
  三 结果  18-23
  四 讨论  23-26
  五 参考文献  26-29
第二部分 急性胰腺炎患者外周血单个核细胞的基因表达谱研究  29-56
  一 实验材料  29-31
  二 方法  31-41
  三 结果  41-50
  四 讨论  50-54
  五 参考文献  54-56
本实验研究结论  56-57
综述：人体外周血游离 DNA 的研究进展  57-68
  参考文献  63-68
中英文对照缩略词表  68-70
攻读学位期间公开发表的论文  70-71
致谢  71-72

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 胰腺疾病
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