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不同转移潜能肝癌细胞株GRP78的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响

作　者: 徐智
导　师: 黄明文
学　校: 南昌大学
专　业: 外科学
关键词: 葡萄糖调节蛋白78 肝细胞肝癌 反义寡核苷酸 侵袭迁移 粘附
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 22次
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内容摘要


目的：研究葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78kD, GRP78)在不同转移潜能肝癌细胞株内的表达状态；运用GRP78反义寡核苷酸(GRP78antisense oligodeoxynucleotide, GRP78 ASODN)抑制肝癌细胞内GRP78的表达后对肝癌细胞生物学行为的影响。方法：(1)运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测两种不同转移潜能肝癌细胞株内GRP78mRNA的表达状态；(2)应用脂质体介导的GRP78反义寡核苷酸转染两种不同转移潜能肝癌细胞株HepG2和MHCC97-H细胞。RT-PCR法再次检测GRP78mRNA的表达状态,Transwell小室实验、细胞粘附实验分别检测两种肝癌细胞的侵袭、迁移及粘附能力。结果：RT-PCR结果显示两种肝癌细胞内均有GRP78的表达,MHCC97-H细胞表达较HepG2高(P<0.05)。GRP78 ASODN转染两种肝癌细胞后,可以有效地抑制两种肝癌细胞株内GRP78 mRNA的表达,两种肝癌细胞株内GRP78mRNA的表达与转染前比较均有下降(P<0.05)。GRP78ASODN转染的MHCC97-H肝癌细胞的侵袭、迁移和粘附能力较其他三组有明显的下降(P<0.05),而HepG2肝癌细胞侵袭、迁移及粘附能力则下降不明显(P>0.05)。结论：(1)两种不同转移潜能的肝癌细胞株MHCC97-H和HepG2细胞内均有GRP78的表达；(2)运用GRP78ASODN可以有效抑制两种肝癌细胞内GRP78 mRNA的表达,并且可以削弱肝癌细胞的侵袭、迁移及粘附能力。抑制肝癌细胞内GRP78的表达为肝癌的分子生物学治疗提供了一个新的思路。GRP78可能成为肝癌治疗上有效的分子靶点。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
第1章 前言  8-10
第2章 材料和方法  10-20
  2.1 实验材料  10-13
    2.1.1 细胞株  10
    2.1.2 主要试剂  10-11
    2.1.3 主要仪器设备  11-12
    2.1.4 主要试剂的配制  12-13
  2.2 实验方法  13-20
    2.2.1 细胞培养  13-14
    2.2.2 脂质体介导的GRP78 ASODN和对照的RODN转染  14-15
    2.2.3 RT-PCR检测GRP78mRNA的表达  15-18
    2.2.4 GRP78ASODN抑制MHCC97-H、HepG2细胞内GRP78表达对两种肝癌细胞体外侵袭能力的影响  18-19
    2.2.5 GRP78ASODN抑制MHCC97-H、HepG2细胞内GRP78表达对两种肝癌细胞体外迁移能力的影响  19
    2.2.6 GRP78ASODN抑制GRP78表达分别对MHCC97-H、HepG2细胞粘附能力的影晌  19
    2.2.7 统计分析  19-20
第3章 结果  20-26
  3.1 GRP78mRNA的在两种肝癌细胞内的表达状态  20
  3.2 GRP78反义寡核苷酸转染效率的检测  20-22
  3.3 GRP78反义寡核苷酸特异性的检测  22-23
  3.4 沉默两细胞株内GRP78 mRNA表达对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响  23-25
  3.5 细胞粘附能力的检测  25-26
第4章 讨论  26-30
  4.1 GRP78的生理功能  26
  4.2 GRP78产生机制及其在肿瘤中的作用  26-27
  4.3 GRP78在肝癌内的表达及其在侵袭转移中的作用  27-30
第5章 结论  30-31
致谢  31-32
参考文献  32-35
攻读学位期间的研究成果  35-36
综述  36-42
  参考文献  41-42

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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