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国内分离的致肾盂肾炎大肠埃希菌papA和papG基因分型的研究
作 者: 吴庆刚
导 师: 陈锦英
学 校: 天津医科大学
专 业: 病原生物学
关键词: 致肾盂肾炎大肠埃希菌 粘附 papa papG 基因分型
分类号: R378
类 型: 博士论文
年 份: 2003年
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内容摘要
尿路感染是一种常见病、多发病,大肠埃希菌为其主要致病菌,导致上行性尿路感染的大肠埃希菌大多具有P菌毛,称为致肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)。编码P菌毛的粘附基因群(pap)位于UPEC的染色体上,由11个基因组成,其中papA编码P菌毛的主要菌毛结构亚单位,papG编码P菌毛尖端与尿道上皮细胞表面受体Gal-Gal结合的真正粘附素。近年来,UPEC papA和papG因在P菌毛组成和粘附致病中的重要作用而成为研究的焦点,尤其对papA和papG的基因分型研究在UPEC的流行病学、致病机理、遗传变异和免疫防治研究中的作用在国外越来越引起人们的关注,国内尚处于空白。 首先,本研究建立了UPEC papC PCR的方法,在其扩增片段内设计了PstⅠ内切酶位点,可用于PCR产物的鉴定,提高该方法的特异性。采用上述方法对国内分离的147株尿源性大肠埃希菌进行检测,UPEC菌株检出率为31.98%(47/147株)。与血凝试验相比较,两种方法检测结果无明显差异(P>0.05)。继而采用多重PCR方法对45株UPEC菌株分别进行了papA和papG的基因分型,探讨国内UPEC菌株的papA和papG的基因组合形式。结果显示,45株UPEC papG的基因型均为Ⅱ型,与国外报道显著不同。其中44株(97.8%)papA基因分型结果阳性,1株(2.2%)papA结果阴性,预示为新的papA基因型。44株UPEC papA分型结果表天津医科大学博士学位论文明,24株(54.55%)具有l个基因型,13株(29.55%)具有2个基因型,4株(9 .09%)和3株(6名2%)分别具有3个和4个基因型。单一基因型较常见的为F7一2(25.00%)、Fll(6.82%)和F16(9.09%)。受试菌株各种基因型出现的频次,优势基因型依次为:F10和F13各12株(2727%)、F7一2和Fll各11株(25.00%)、F14 10株(22.72%)和F169株(20.45%);具有2个以上基因型的组合形式与国外不同,并首次发现了4个基因型(FS+Fg+F13+F14)组合的UPEC菌株。表明国内UPEC菌株存在p即A的多态性。 同时,采用PCR克隆的方法对papA多重PCR不能分型的uPEc 4030株的papA和p即G基因克隆和序列分析,结果显示,papA由720个核普酸组成,编码192个氨基酸的多肤。与国外报道的10个基因型的papA核普酸序列和推导氨基酸序列同源性比较,分别为36.n一77.95%和21.11一78.34%;与p即A基因分型多重pCR引物比较,uPEC403o在各基因型下游引物相应位置序列同源性仅为10一“.67%,表明该菌株paPA确实为新基因型,并验证了p即A基因分型方法的可靠性。砷Ec4030与天津地区曾报道UPEC 132(F13型)paPA核普酸和推导氨基酸序列比较,其同源性分别为49.70%和46.18%,变异部位主要出现在可变区和Cys一Cys区;但p即G均为n型,其核昔酸和推导氨基酸序列同源性分别为98.89%和99.01%。 综上所述,国内分离UPEC菌株paPG高度保守;而p即A呈现高度多态性,并出现与国外不同的基因型,有关临床和流行病学意义值得深入研究。
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全文目录
1 中文摘要 4-6 2 英文摘要 6-9 3 前言 9-13 4 正文 13-102 第一部分 papC PCR方法用于UPEC的鉴定 13-21 材料和方法 13-17 结果 17-18 讨论 18-21 第二部分 国内分离的UPEC菌株papA和papG的基因分型 21-43 材料和方法 22-28 结果 28-37 讨论 37-43 第三部分 致肾盂肾炎大肠埃希菌UPEC4030株papA和papG基因的克隆和序列分析 43-90 材料和方法 44-52 结果 52-84 讨论 84-90 小结 90-91 参考文献 91-102 5 综述 102-116 参考文献 110-116 6 附录 116-117 7 致谢 117
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学) > 病原细菌
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