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槟榔花提取物抗衰老作用研究

作　者: 张春梅
导　师: 王仁才；陈卫军
学　校: 湖南农业大学
专　业: 药用植物资源工程
关键词: 槟榔花提取物酚类化合物抗衰老人体低密度脂蛋白 DNA损伤
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

槟榔花是居于四大南药之首-槟榔(Areca Catechu Linn1的雄花蕾,开花多,花期长,冬花不结果。据中药志记载,槟榔花具有消除疲劳和防止衰老的功效,以“微型营养品”、“长寿食品”著称,但目前槟榔花的具体药用功效成分以及功效成分的提取与利用方面研究尚未见报道。本文以槟榔花序为试材,采用不同的体外试验模型进行了槟榔花不同提取物抗衰老作用研究,并结合D-半乳糖致衰小鼠试验进一步论证提取物延缓衰老的功能,主要研究结果如下：1.以Fenton反应为模型,通过不同槟榔花提取物(沸水提取物、冷水提取物及乙醇提取物)对羟基自由基诱导2-脱氧核糖降解的保护作用的研究。结果表明,相同浓度下的3种提取物中,沸水提取物抑制脱氧核糖降解和清除DPPH自由基的能力最强(清除率分别高于60%和95%),但对Fe2+的络合能力和Fe3+还原能力相对较弱,冷水提取物对Fe3+还原能力稍强于另外两种,乙醇提取物对Fe2+的络合能力的较强。2.以人体低密度脂蛋白(LDL)为试材,通过不同提取物对LDL脂质过氧化的抑制作用、总抗氧化能力及其对Cu2+的络合能力的测定。结果表明：槟榔花3种提取物对LDL氧化的抑制作用及对Cu2+络合能力以沸水提取物最强,冷水提取物次之,乙醇提取物最弱,三者抑制共轭二烯的迟滞时间分别为126±5.29min、108±3.34 min和95±3.06min。3.通过槟榔花提取物对羟基自由基致人体白蛋白(HSA)氧化过程中蛋白质羰基含量、蛋白质过氧化物含量及蛋白质结构变化的影响研究,发现槟榔花沸水提取物对蛋白质氧化的保护作用最强,冷水提取物次之,乙醇提取物最弱。4.利用自由基诱导DNA损伤模型,通过槟榔花沸水提取物和冷水提取物与Trolox的交互作用及其对DNA损伤的保护作用的研究,发现沸水提取物能够增强Trolox的抗氧化活性,增强其对DNA损伤的保护作用,且其作用效果优于冷水提取物与Trolox交互作用效果。5.通过对3种提取物总酚含量测定及利用高效液相色谱(HPLC)法对其酚类化合物的分析发现,沸水提取物、冷水提取物和乙醇提取物的总酚含量中以沸水提取物最高5.81±0.04 mg/g),冷水提取物次之(5.02±0.01mg/g),而乙醇提取物最低(3.17±0.07 mg/g)。3种提取物中均含没食子酸、香豆酸、表儿茶素、阿魏酸、芦丁和柚皮素等6种成分,其中以表儿茶素、没食子酸和香豆酸3种成分的含量相对较高,为提取物中主要的酚类物质,此3种成分又以沸水提取物含量最高。6.利用D-半乳糖致衰模型,通过槟榔花沸水提取物对衰老小鼠肝组织中各种抗氧化酶活性、端粒长度、线粒体呼吸链复合物及衰老相关作用因子NQO1、HO1、Nrf2和Sirt1蛋白表达影响的研究表明,槟榔花沸水提取物具有明显延缓衰老的作用。综合前期体外抗氧化试验结果,说明槟榔花沸水提取物具有显著抗氧化作用可能是其抗衰老的主要作用,且其在抗氧化与衰老方面具有较好的研究与应用价值。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-13
第一章绪论  13-19
  1 槟榔花的研究现状  13-14
    1.1 种植情况  13
    1.2 生物学特性  13
    1.3 生物活性  13-14
  2 植物抗衰老作用研究进展  14-17
    2.1 自由基与衰老  14-15
    2.2 线粒体DNA与衰老  15
    2.3 端粒、端粒酶与衰老  15-16
    2.4 抗氧化剂与衰老  16-17
      2.4.1 非酶类抗氧化剂与衰老  16
      2.4.2 酶类抗氧化剂与衰老  16
      2.4.3 植物提取物与衰老  16-17
  3 研究的目的与主要内容  17-19
    3.1 研究目的与意义  17
    3.2 研究的主要内容  17-19
第二章槟榔花提取物对羟基自由基诱导脱氧核糖降解的保护作用  19-24
  1 材料与方法  19-21
    1.1 试验材料  19
    1.2 试验仪器和试剂  19-20
    1.3 试验方法  20-21
      1.3.1 羟基自由基介导的2-脱氧核糖降解的保护试验  20
      1.3.2 Fe~(2+)络合能力的测定  20
      1.3.3 还原能力的测定  20
      1.3.4 DPPH自由基的清除作用  20-21
      1.3.5 数据统计分析  21
  2 结果与分析  21-23
    2.1 不同提取物对羟基自由基介导2-脱氧核糖降解的保护作用  21
    2.2 不同提取物对Fe~(2+)络合能力的影响  21-22
    2.3 不同提取物对Fe~(3+)还原能力的影响  22
    2.4 不同提取物对DPPH自由基的清除作用  22-23
  3 讨论  23-24
第三章槟榔花提取物对Cu~(2+)诱导人体低密度脂蛋白氧化的保护作用  24-29
  1 材料与方法  24-26
    1.1 试验材料  24
    1.2 试剂与仪器  24-25
    1.3 试验方法  25
      1.3.1 LDL的分离  25
      1.3.2 LDL的氧化动力学试验  25
      1.3.3 硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)测定  25
      1.3.4 三价铁还原抗氧化能力(FRAP)测定  25
      1.3.5 Cu~(2+)络合能力测定  25
    1.4 数据分析  25-26
  2 结果与分析  26-28
    2.1 不同提取物的LDL氧化动力学试验  26
    2.2 不同提取物对Cu~(2+)诱导的LDL氧化程度的影响  26-27
    2.4 不同提取物对Cu~(2+)络合能力的影响  27-28
    2.5 不同提取物对三价铁还原抗氧化能力(FRAP)的影响  28
  3 讨论  28-29
第四章槟榔花提取物对过氧化氢诱导的人血清白蛋白损伤的保护作用  29-35
  1 材料与方法  29-31
    1.1 材料  29
    1.2 化学试剂与仪器  29-30
    1.3 试验方法  30
      1.3.1 蛋白质氧化处理  30
      1.3.2 羰基含量的测定  30
      1.3.3 氢过氧化物试验  30
      1.3.4 光谱学试验  30
      1.3.5 清除过氧化氢试验  30
    1.4 统计分析  30-31
  2 结果与分析  31-33
    2.1 不同提取物对蛋白质羰基含量的影响  31
    2.2 不同提取物对蛋白质氢过氧化物的影响  31-32
    2.3 不同提取物对蛋白质结构变化的影响  32-33
    2.4 不同提取物对过氧化氢的清除能力的影响  33
  3 讨论  33-35
第五章槟榔花提取物及其与Trolox相互作用对自由基诱导DNA氧化损伤的影响  35-42
  1 材料与方法  35-37
    1.1 试验材料  35
    1.2 试剂与仪器  35-36
    1.3 试验方法  36
      1.3.1 羟基自由基(·OH)诱导的氧化DNA链断裂试验  36
      1.3.2 过氧亚硝基阴离子(ONOO~-)诱导的超螺旋DNA断裂试验  36
    1.5 ABTS自由基清除试验  36-37
    1.6 β-胡萝卜素自氧化试验  37
    1.7 对脂肪氧合酶抑制能力的测定  37
    1.8 统计分析  37
  2 结果与分析  37-41
    2.1 不同提取物对羟基自由基诱导的DNA链断裂的影响  37-38
    2.2 不同提取物对过氧亚硝基阴离子诱导的DNA链断裂的影响  38-39
    2.3 不同提取物对ABTS~+自由基阳离子的清除能力的影响  39
    2.4 不同提取物对β-胡萝卜素-亚油酸体系的抗氧化能力的影响  39-40
    2.5 不同提取物对脂肪氧合酶(LOX)的抑制能力的影响  40-41
  3 讨论  41-42
第六章槟榔花提取物总酚含量测定及其酚类化合物成分分析  42-51
  1 材料与方法  42-43
    1.1 试验材料  42
    1.2 试验仪器及试剂  42-43
    1.3 试验方法  43
      1.3.1 总酚含量的测定  43
      1.3.2 提取物酚类化合物成分分析  43
  2 结果与分析  43-49
    2.1 槟榔花不同提取物的总酚含量  43-44
    2.2 不同提取物酚类化合物的成分分析  44-49
      2.2.1 酚类化合物成分分析HPLC色谱条件的优化  44-46
      2.2.2 线性关系和检测限  46-47
      2.2.3 回收率的测定  47
      2.2.4 不同提取物酚类化合物的成分分析  47-49
  3 讨论  49-51
第七章槟榔花沸水提取物对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用研究  51-60
  1 材料与方法  51-52
    1.1 试验材料  51
    1.2 造模方法  51
    1.3 指标测定  51-52
      1.3.1 认知相关行为学测试  51-52
      1.3.2 氧化损伤及抗氧化体系测定  52
  2 结果与分析  52-57
    2.1 沸水提取物对衰老小鼠认知相关行为学的影响  52-54
      2.1.1 转棒试验  52-53
      2.1.2 抓力计试验  53
      2.1.3 水迷宫试验  53-54
    2.2 沸水提取物对衰老小鼠肝MDA含量的影响  54
    2.3 沸水提取物对衰老小鼠肝过氧化氢酶活性的影响  54
    2.4 沸水提取物对衰老小鼠肝SOD活性的影响  54-55
    2.5 沸水提取物对衰老小鼠肝端粒长度的影响  55
    2.6 沸水提取物对衰老小鼠肝线粒体呼吸链酶复合物的影响  55-56
    2.7 沸水提取物对衰老小鼠肝Ⅱ相解毒酶NQO1、HO1及逆转录因子Nrf2、Sirt1的影响  56-57
  3 讨论  57-60
    3.1 D-半乳糖衰老模型评价  57-58
    3.2 槟榔花沸水提取物抗衰老作用机制  58-59
    3.3 槟榔花提取物、抗氧化与抗衰老作用的相互关系  59-60
全文结论、创新点与展望  60-64
参考文献  64-74
附录1 缩略词表  74-75
附录2 化合物结构图  75-77
致谢  77-78
作者简介  78

槟榔花提取物抗衰老作用研究

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