学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定

作　者: 曹黎黎
导　师: 王君伟
学　校: 东北农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 牛IFN-γ 单克隆抗体 特性鉴定
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 17次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


γ-干扰素(IFN-γ)主要是在特定的抗原、有丝分裂原的刺激下由活化T淋巴细胞或NK细胞产生的一类具有广谱抗病毒免疫调节等多种生物学活性的糖蛋白。国内外在牛IFN-γ的研究和应用方面的工作已经开展很多,但不论是对免疫细胞功能及机体细胞免疫应答方面的研究,还是对疾病状态下IFN-γ产生水平的判定,都需要一种简便、快速的检测手段。应用牛IFN-γ单克隆抗体作为研究、检测IFN-γ的手段,在免疫机制的研究、免疫功能检测等领域具有广泛的应用。本研究用原核表达的重组牛IFN-γ(rHis-BoIFN-γ)免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,免疫3次后取其脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经3~5次亚克隆,最终获得12株能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株。亚类鉴定结果显示12株杂交瘤细胞均为IgG,其中5株为IgG1,3株为IgG2a,4株为IgG2b。12株杂交瘤细胞在体外具有稳定分泌抗BoIFN-γ单克隆抗体的能力。Western-blot及间接ELISA证明12株单抗均可特异性的结合rBoIFN-γ蛋白。通过间接免疫荧光显示,12株单抗均与真核细胞BHK21表达的rBoIFN-γ反应产生荧光反应,证明了单抗能够与真核细胞产生的BoIFN-γ反应,证实了单抗的特异性。ELISA叠加试验表明,3C2与1H4、1G6与1G4针对不同表位,1A10、1B2、2B9、3C4 4株和1C1与1G6、1G4与3C2、1A10与1G8针对相同或相近的表位。为利用单克隆抗体建立检测BoIFN-γ抗原捕获ELISA方法诊断牛疫病,及重组BoIFN-γ的亲和层析纯化提供了物质材料,为深入研究BoIFN-γ单抗在牛临床免疫学方面的应用奠定了基础。

全文目录


摘要  8-9
英文摘要  9-10
1 引言  10-20
  1.1 IFN 的发现及分类  10
  1.2 IFN-γ的理化特征及分子结构  10-11
    1.2.1 IFN-γ的理化特征  10-11
    1.2.2 IFN-γ的分子结构  11
  1.3 IFN-γ受体及作用机理  11-13
    1.3.1 IFN-γ受体  11-12
    1.3.2 IFN-γ信号传导途径  12-13
  1.4 IFN-γ的生物学活性  13-15
    1.4.1 IFN-γ的免疫调节活性  13
    1.4.2 IFN-γ的抗病毒活性  13
    1.4.3 IFN-γ的抗肿瘤活性  13-14
    1.4.4 IFN-γ的神经调节作用  14
    1.4.5 IFN-γ的抗寄生虫作用  14
    1.4.6 产 NO 活性分析  14-15
  1.5 IFN-γ免疫学分析方法  15-17
    1.5.1 抗原捕获 ELISA  15
    1.5.2 免疫聚合酶链式反应  15-16
    1.5.3 细胞内细胞因子流式细胞术  16
    1.5.4 酶联免疫斑点试验  16
    1.5.5 实时荧光定量PCR  16-17
  1.6 BoIFN-γ应用研究进展  17-18
  1.7 抗 IFN-γ单克隆抗体的应用  18-19
    1.7.1 IFN-γ单抗的应用及发展前景  18
    1.7.2 提纯重组干扰素  18
    1.7.3 为部分疾病的诊断提供平台  18
    1.7.4 进行免疫检测和免疫细胞的功能研究  18-19
  1.8 本研究的目的与意义  19-20
2 材料与方法  20-28
  2.1 材料  20-22
    2.1.1 质粒及菌株  20
    2.1.2 实验动物及细胞  20
    2.1.3 主要试剂  20
    2.1.4 主要仪器和设备  20-21
    2.1.5 主要溶液配置  21-22
  2.2 方法  22-28
    2.2.1 抗原的制备  22-23
    2.2.2 BALB/c 鼠的免疫  23
    2.2.3 间接 ELISA 检测方法的建立  23
    2.2.4 建立杂交瘤细胞株  23-25
    2.2.5 杂交瘤细胞鉴定  25
    2.2.6 单克隆抗体的鉴定  25-26
    2.2.7 阻断 ELISA 分析单抗与真核细胞表达rBoIFN-γ反应性  26-27
    2.2.8 单克隆抗体识别位点的分析  27
    2.2.9 单克隆抗体腹水的制备  27-28
3 结果与分析  28-36
  3.1 免疫原的 SDS-PAGE 分析  28
  3.2 间接 ELISA 筛选方法的建立  28
  3.3 阳性杂交瘤细胞的筛选结果  28-29
  3.4 杂交瘤细胞株的鉴定  29-31
    3.4.1 杂交瘤细胞染色体数分析  29
    3.4.2 杂交瘤细胞稳定性分析  29-31
  3.5 单克隆抗体的鉴定  31-33
    3.5.1 单克隆抗体 Ig 亚类的鉴定  31
    3.5.2 Western blot 鉴定  31-33
    3.5.3 单克隆抗体特异性鉴定  33
    3.5.4 间接免疫荧光分析  33
  3.6 阻断 ELISA 分析单抗与真核细胞表达rBoIFN-γ反应性  33-34
  3.7 单克隆抗体识别位点的分析  34-35
  3.8 单克隆抗体腹水效价的测定  35-36
4 讨论  36-38
  4.1 单克隆抗体性质的分析  36
  4.2 单克隆抗体的抗原位点分析  36-37
  4.3 BoIFN-γ单克隆抗体的应用前景的分析  37-38
5 结论  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-45
攻读硕士学位期间发表的学术论文  45

相似论文

  1. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  2. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
  3. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  4. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  5. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  6. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  7. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  8. 抗噻菌灵单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立,S482.2
  9. 氯噻啉酶联免疫吸附分析方法研究,S482.3
  10. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  11. 猪TNF-α单克隆抗体制备与PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞TNF-α变化规律研究,S858.28
  12. H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及其AC-ELISA检测方法的建立,S855.3
  13. 日本血吸虫重组蛋白rSjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定,R392
  14. 三聚氰胺单克隆抗体制备及间接竞争ELISA方法的初步建立,S859.84
  15. 人TLT-2基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制,R392
  16. 乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与初步应用,R392
  17. 鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究,R392
  18. 鼠抗人PD-L2单克隆抗体的制备及人可溶性PD-L2ELISA试剂盒的研制,R392
  19. 人乳头瘤病毒16型E7蛋白单克隆抗体的研制,R737.33
  20. 1.tmTNF-α通过TNFR2诱导凋亡的信号途径 2.抗体的制备及鉴定,R392
  21. 抗软骨藻酸单克隆抗体直接竞争ELISA方法的建立及试剂盒的组装,X835

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com